活菌H37Ra與滅活菌H37Rv感染小鼠腹腔巨噬細胞實驗研究.pdf

1、目的：探討小鼠腹腔接種結核分枝桿菌活菌H37Ra、滅活菌H37Rv后的免疫物質的表達差異，了解它們的免疫物質的表達情況和相關的信號通路，探討活菌H37Ra及滅活菌H37Rv作為新的結核候選疫苗的可行性。
　　方法：1.分別培養(yǎng)BALB/c小鼠腹腔巨噬細胞，用活菌H37Ra，滅活菌H37Rv感染10h后用抗酸染色方法，在顯微鏡下觀察各組巨噬細胞吞噬情況并計算兩種結核分枝桿菌的吞噬率。2.將活菌H37Ra，滅活菌H37Rv，生理鹽水分

2、別接種BALB/c小鼠腹腔，免疫30d后取小鼠腹腔巨噬細胞，RT-PCR法檢測小鼠腹腔巨噬細胞IL～12p40，TNF-a，IFN-γ，的基因轉錄水平；ELISA法檢測細胞因子IL-12p40，TNF-a，IFN-γ的表達；Griess法，化學法檢測小鼠腹腔巨噬細胞分泌NO、H3O2水平；流式細胞儀檢測IFN-γ誘導的CD40L的變化情況。3.將活菌H37Ra，滅活菌H37Rv，生理鹽水分別接種BALB/c小鼠腹腔，免疫30d后取小鼠腹

3、腔巨噬細胞，用IFN-γ，刺激1天，用流式細胞儀，共聚焦及western檢測巨噬細胞表面CD40L的變化情況。
　　結果：1.巨噬細胞對活菌H37Ra和滅活菌H37Rv的吞噬率分別為(55.71±8.42)％，(14.82±2.12)％，與滅活菌相比，活菌H37Ra有更強的被吞噬能力(P<0.01)。2.小鼠腹腔巨噬細胞被活菌H37Ra免疫后能顯著誘導巨噬細胞的IL-12P40、TNF及IFN-γ基因的轉錄，細胞因子IL-12P4

4、0、TNF-a、TFN-γ、NO及H2O2高水平分泌：3.外源性細胞因子IFN-γ更能刺激活菌H37Ra誘導巨噬細胞表面CD40L的高表達。
　　結論：活的結核分枝桿菌減毒株H37Ra，能顯著誘導小鼠腹腔巨噬細胞產生更多的保護性免疫物質，有利于免疫應答和免疫保護，有可能作為新的結核候選疫苗，同時，IFN-γ是誘導刺激小鼠腹腔巨噬細胞產生免疫應答的重要因子，而CD40L信號途徑是介導刺激巨噬細胞產生免疫應答的信號通路之一；IFN-γ