茁芽短梗霉的復(fù)合誘變和發(fā)酵條件優(yōu)化.pdf

1、普魯蘭(Pullulan)又稱為短梗霉多糖，是由α-(1,6)-葡萄糖苷鍵連接麥芽三糖構(gòu)成的線性分子，在環(huán)境污染治理、食品工業(yè)等領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用前景。本課題的研究主要集中于茁芽短梗霉的復(fù)合誘變、篩選高產(chǎn)變異株、探索變異株的最佳發(fā)酵條件，并測定變異株的生長曲線。 以短梗霉N3.837為原始株，液體搖床預(yù)培養(yǎng)16—20h，收獲菌體，用無菌生理鹽水洗滌制成菌懸液。對菌懸液進行微波輻射，稀釋涂布培養(yǎng)，計菌落數(shù)，并與未經(jīng)輻射的菌落數(shù)進

2、行比較，計算致死率并繪制微波誘變致死率曲線，得到致死率在95％以上仍存活的菌株16株。對16株誘變獲得菌株進行發(fā)酵實驗，用硫酸蒽酮法測定發(fā)酵培養(yǎng)基原液總糖量，用無水乙醇沉淀多糖，并觀察發(fā)酵液顏色。其中，KL15多糖產(chǎn)率最高，達到17.45％，是原始株（8.87％）的2倍左右。 以KL15為出發(fā)菌株，制備菌懸液，分別添加DES和EMS進行化學(xué)誘變，稀釋涂布培養(yǎng)，繪制致死率曲線，得到經(jīng)DES誘變后致死率在90％以上仍存活的菌株17

3、株，以及經(jīng)EMS后致死率在90％以上仍存活的菌株15株，對這32株誘變獲得菌株進行發(fā)酵篩選。其中，KL22的黑色素產(chǎn)量最少，多糖產(chǎn)率高，達到23.88％，且產(chǎn)多糖能力穩(wěn)定。利用單因素實驗方法對變異株KL22的發(fā)酵條件進行優(yōu)化研究，研究因素為發(fā)酵培養(yǎng)基的初始pH值，得到最佳初始pH值為6.6，且KL22的產(chǎn)普魯蘭能力對初始pH值的變化相當(dāng)敏感，初始pH值的微小改變就會導(dǎo)致多糖產(chǎn)率的明顯變化。 對KL22進行生長曲線測定實驗，培養(yǎng)