鷹嘴豆納豆發(fā)酵菌種誘變及發(fā)酵條件優(yōu)化.pdf

1、為了提高納豆中的蛋白酶活力，以納豆芽孢桿菌為菌種，對鷹嘴豆納豆液態(tài)發(fā)酵進行優(yōu)化。將蛋白酶活力作為指標，采用Plackett-Burman法篩選出三個對蛋白酶活力影響最大的因素:裝液量、轉(zhuǎn)速和鷹嘴豆粉添加量;通過響應面法優(yōu)化鷹嘴豆納豆液態(tài)發(fā)酵的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件，所建立的二次回歸方程擬合度良好，對提高蛋白酶活力影響顯著(p=0.0006)，所得最佳培養(yǎng)基為鷹嘴豆粉添加量5.9％，豆粕粉1.0％，葡萄糖0.6％，氯化鈉0.5％，最佳發(fā)酵條件為

2、:轉(zhuǎn)速250r/min，裝液量76/500mL，溫度37℃，發(fā)酵時間48h。該條件下發(fā)酵所得蛋白酶活力達3558.0±1.5U/mL，相對于對照培養(yǎng)基的2491.4±2.8U/mL提高了42.8％，而且通過纖維蛋白平板法的驗證，納豆激酶溶解面積提高了108.6％。結(jié)果表明，優(yōu)化后的培養(yǎng)基組成和發(fā)酵條件能有效提高蛋白酶活力。
　　利用復合誘變的手段，探究了超高壓和紫外誘變對納豆芽孢桿菌的適宜劑量和強度，選育蛋白酶產(chǎn)量高、活力強的優(yōu)質(zhì)

3、復合誘變納豆芽孢桿菌。確定超高壓誘變條件250MPa、5min，紫外誘變條件15W、20cm、照射50s。單一誘變與復合誘變菌株的延滯期顯著縮短，提前進入對數(shù)生長期。超高壓-紫外復合誘變菌株P(guān)-UV-4在蛋白酶活力的提高上尤為明顯，是出發(fā)菌株的2.44±0.12倍、是超高壓單一誘變菌株的1.32±0.07倍。在生物量方面，P-UV-4最低，但是其比蛋白酶活力是出發(fā)菌株的14.23±0.71倍、是超高壓誘變菌株的3倍左右。實驗結(jié)果表明，復

4、合誘變更適合該菌株，且正向突變程度大，復合誘變是誘變育種的優(yōu)良思路。
　　對比優(yōu)化前后的培養(yǎng)基、出發(fā)菌株和誘變菌株，結(jié)果表明，菌株P(guān)-UV-4在優(yōu)化培養(yǎng)基中適應性好，最高蛋白酶活可達4227.3±211.4U/mL，最高菌數(shù)為4.89×109CFU/mL。
　　通過Origin9.0軟件對發(fā)酵動力學曲線分析數(shù)據(jù)并進行擬合，基于修正Logistic方程得到菌體生長模型為y=-9.06029/1+(x/0.64828)1.426