紅豆杉資源遺傳多樣性分析及南方紅豆杉愈傷組織誘導(dǎo)體系的建立.pdf

1、紅豆杉是國(guó)家一級(jí)保護(hù)植物,由于紅豆杉含有具有重要的抗癌物質(zhì)紫杉醇,紅豆杉資源的保護(hù)面臨著諸多困難.該研究從南方紅豆杉資源的有效保護(hù)出發(fā),以福建省武平縣梁野山國(guó)家自然保護(hù)區(qū)的萬(wàn)畝南方紅豆杉自然種群為主要材料,研究南方紅豆杉群落的遺傳多樣性及其與其它類型紅豆杉資源的關(guān)系,并建立其愈傷組織誘導(dǎo)技術(shù)體系,主要結(jié)果如下:(1)南方紅豆杉側(cè)芽是誘導(dǎo)愈傷組織的最佳外植體.(2)南方紅豆杉愈傷組織誘導(dǎo)的最佳培養(yǎng)基為:B<,5>+2,4-D 2.0mg/

2、L+NAA 1.0mg/L+IAA0.2mg/L+LH 2.0g/L+AC 0.5g/L.(3)紅豆杉愈傷組織增殖的培養(yǎng)基:B<,5>'+NAA 4.0mg/L+2,4-D 0.5mg/L+GA<,3> 0.2mg/L+AC 0.5g/L+LH 2.0g/L,AC、LH和GA<,3>三種物質(zhì)一起使用,基本遏制了褐化的發(fā)生,可取得較好的效果.(4)南方紅豆杉RAPD分析的最佳技術(shù)體系為:25μl反應(yīng)體積中,含200μmol/L dNTP,

3、0.2μmol/L隨機(jī)引物,30~100ng模板DNA,1.5UTaq DNA聚合酶.反應(yīng)程序?yàn)?首先94℃預(yù)變性3.0 min;94℃變性1.0 min;36℃退火2.0 min,72℃延伸2.0 min,45個(gè)循環(huán)后,72℃延伸10.0 min.最后于4℃保存直至取出.(5)在11個(gè)供試材料中,9個(gè)RAPD引物共擴(kuò)增出398條帶,多態(tài)性條帶比率(PPB)接近27％,表明供試紅豆杉材料之間的遺傳基礎(chǔ)較窄.(6)依據(jù)RAPD分析數(shù)據(jù),對(duì)