石榴花多酚對(duì)糖尿病大鼠血糖血脂的影響及其作用機(jī)制的研究.pdf

1、目的：
　　 石榴花是傳統(tǒng)維吾爾藥材，用于治療具有“三多一少”特征的疾病，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究發(fā)現(xiàn)石榴花提取物具有良好的降糖活性。本研究通過提取石榴花多酚，建立糖尿病大鼠模型，觀察其對(duì)糖尿病大鼠血糖、血脂以及胰島素抵抗的影響，并進(jìn)一步探討石榴花多酚降糖及緩解胰島素抵抗的分子機(jī)制，為開發(fā)和有效利用維吾爾地方藥材提供理論依據(jù)。
　　 方法與結(jié)果：
　　 第一部分：石榴花多酚制備
　　 選用D101大孔樹脂純化方法提取

2、石榴花，以總酚含量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，獲得多酚得率為68％的石榴花多酚。并通過正交試驗(yàn)，研究不同因素對(duì)石榴花多酚物質(zhì)浸出率的影響，確定最佳的提取方法為：以60％乙醇作溶液，料液比為(g：ml)1:20，在50℃下提取2次，每次提取時(shí)間為1h，此條件下穩(wěn)定性較好。
　　 第二部分；石榴花多酚對(duì)糖尿病大鼠藥效學(xué)研究
　　 1.制備糖尿病大鼠模型
　　 高脂飼料加腹腔注射鏈脲佐菌素(STZ)45mg·kg-1復(fù)制糖尿病大鼠模型

3、，空腹血糖(FPG)≥11.1mmol·L-1，確定為糖尿病成模大鼠。所得模型鼠明顯多飲、多食、多尿、喜臥、毛發(fā)灰暗、生長(zhǎng)緩慢；并且具備高空腹血糖，高胰島素水平及胰島素抵抗等特點(diǎn)，接近人類2型糖尿病發(fā)病特征。
　　 2.分組給藥并檢測(cè)指標(biāo)
　　 以二甲雙胍(100mg·kg-1)為陽性對(duì)照藥物，石榴花多酚(100mg·kg-1，300mg·kg-1)給藥四周后，分別測(cè)定各項(xiàng)指標(biāo)，結(jié)果如下：石榴花多酚兩劑量組和二甲雙胍組均

4、能有效降低糖尿病大鼠血清中的FPG、TC、TG、LDL-C；顯著升高HDL-C/TC比值(P<0.05，P<0.01)；對(duì)體重?zé)o明顯影響；石榴花多酚兩劑量組和二甲雙胍組均能有效降低糖尿病大鼠FIns水平，降低IRI，并增加ISI(P<0.05，P<0.01)。光鏡下分別觀察肝臟和胰島細(xì)胞的病理學(xué)改變顯示石榴花多酚兩劑量組對(duì)糖尿病大鼠肝臟組織和胰島細(xì)胞有一定的保護(hù)作用。
　　 第三部分：石榴花多酚降糖機(jī)制的研究
　　 1.

5、石榴花多酚對(duì)糖尿病大鼠糖原合成的影響及機(jī)制
　　 測(cè)定大鼠肌、肝糖原含量(MG、HG)含量；骨骼肌己糖激酶(HK)活性、肝臟葡萄糖激酶(GK)活性；Western Blot法檢測(cè)大鼠骨骼肌中糖原合酶激酶-3β(GSK-3β)和AMP活化蛋白激酶α(AMPKα)和磷酸化AMP活化蛋白激酶α(P-AMPKα)的蛋白含量。
　　 結(jié)果顯示：石榴花多酚可有效增加MG含量(P<0.05，P<0.01)，PFPⅡ組HK活性明顯增強(qiáng)(

6、P<0.01)；但肝臟HG含量和GK活性無明顯改變(P>0.05)；PFPⅠ組中GSK-3β的蛋白表達(dá)降低(P<0.01)，P-AMPKa的表達(dá)量(P<0.01)及P-AMPKα/AMPKα(P<0.05)則顯著增加。
　　 2.石榴花多酚對(duì)糖尿病大鼠胰島素抵抗水平的影響
　　 分光光度法測(cè)定血清游離脂肪酸(FFA)濃度；ELISA法測(cè)定血清白介素-6(IL-6)和白介素-18(IL-18)含量。分光光度法觀察石榴花多酚

7、溶液在Mn2+-H2O2-PAR體系中對(duì)·OH的抑制率和對(duì)DPPH·的清除率；分別檢測(cè)大鼠肝臟和骨骼肌中超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化氫酶(CAT)、還原型谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)。RT-PCR法測(cè)定大鼠肝臟中PPARα/γmRNA水平；Western Blot法檢測(cè)PPARα/γ蛋白表達(dá)水平。
　　 結(jié)果顯示：1)石榴花多酚能有效降低糖尿病大鼠血清FFA和IL-6，兩個(gè)劑量組均(P<0.05)。但對(duì)IL-18無顯

8、著影響(P>0.05)；2)體外抗氧化實(shí)驗(yàn)中石榴花多酚(0.08mg·ml-1)在Mn2+-H2O2-PAR體系中對(duì)·OH的清除率46％，相當(dāng)于Vc(0.2mg·ml-1)的3倍；石榴花多酚(0.02mg·ml-1)對(duì)DPPH·的清除率87％，約為Vc(0.2mg·ml-1)的5倍。石榴花多酚能有效增加糖尿病大鼠肝臟CAT活力(P<0.05)；PFPⅡ組SOD顯著升高(P<0.01)；PFPⅠ組MDA則顯著降低(P<0.05)；骨骼肌中

9、，PFPⅡ組大鼠SOD顯著升高(P<0.01)；兩劑量組中MDA明顯降低，GSH則顯著增加(P<0.05，P<0.01)；3)石榴花多酚兩個(gè)劑量組中PPARγ mRNA的表達(dá)增強(qiáng)(P<0.01)，PFPⅠ組中PPARα mRNA的表達(dá)量增加；PFPⅠ組中PPARγ蛋白表達(dá)量增加(P<0.05)，兩劑量組中PPARα蛋白表達(dá)量均上調(diào)(P<0.05)。
　　 3.初探石榴花多酚對(duì)糖尿病大鼠血管內(nèi)皮功能的影響
　　 ELISA

10、法測(cè)定大鼠血漿中以下各指標(biāo)，結(jié)果顯示：石榴花多酚兩個(gè)劑量組中ET-1、ATⅡ和TXB2濃度均顯著降低，6-Keto-PGF1a顯著增加，TXB2/6-Keto-PGF1a均明顯降低(P<0.01，P<0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1.石榴花多酚具有良好的降糖作用：通過增加糖尿病大鼠骨骼肌糖原含量降低血糖；機(jī)制可能與增強(qiáng)骨骼肌組織中己糖激酶活性，下調(diào)糖原合酶激酶-3的蛋白表達(dá)及增強(qiáng)骨骼肌AMPK活性有關(guān)。
　　

11、 2.石榴花多酚可以緩解胰島素抵抗水平;可能與降低血清中TG、FFA和血清炎癥介質(zhì)IL-6含量；清除糖尿病大鼠體內(nèi)自由基有關(guān)；還可通過上調(diào)肝臟PPARα/γ的蛋白表達(dá)，提高肝臟組織對(duì)胰島素敏感性；通過降低骨骼肌中GSK-3β的表達(dá)，增加AMPK活性，提高骨骼肌組織對(duì)胰島素的敏感性。
　　 3.石榴花多酚對(duì)糖尿病大鼠的血管內(nèi)皮有一定的保護(hù)作用：血漿中ET-1和ATⅡ濃度及TXB2和6-Keto-PGF1a比值下降提示石榴花多酚對(duì)糖