Ghrelin對(duì)糖尿病大鼠認(rèn)知功能的影響及其機(jī)制研究.pdf

1、第一部分Ghrelin對(duì)糖尿病大鼠海馬神經(jīng)元BDNF、CREB的表達(dá)及其認(rèn)知功能的影響
　　 目的:研究側(cè)腦室注射Ghrelin對(duì)糖尿病大鼠海馬神經(jīng)元cAMP反應(yīng)元件結(jié)合蛋白(cAMP responsive element binding protein,CREB)和腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)表達(dá)的影響。
　　 方法:雄性SD大鼠48只隨機(jī)分為正常對(duì)

2、照組12只(C組),糖尿病組12只(D組),糖尿?。獹hrelin組12只(T1組),糖尿?。獹hrelin＋D-1ys3-GHRP-6組12只(T2組)。建立STZ糖尿病大鼠模型,成模11周時(shí),open-field實(shí)驗(yàn)排除合并有抑郁癥的大鼠。T1組大鼠側(cè)腦室注射Ghrelin200ng/只/天,T2組側(cè)腦室注射Ghrelin(200ng)＋D-lys3-GHRP-6(60μg/只/天)。C組和D組注射等體積生理鹽水。連續(xù)7天。Morn

3、s水迷宮測(cè)試各組大鼠學(xué)習(xí)與記憶能力。處死大鼠,心臟灌注留取大鼠海馬標(biāo)本。RT-PCR檢測(cè)大鼠海馬BDNF,CREB mRNA的表達(dá),免疫組化檢測(cè)海馬神經(jīng)元神經(jīng)元BDNF,CREB,磷酸化CREB(p-CREB)蛋白表達(dá)。
　　 結(jié)果:Open-field實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:各組大鼠的活動(dòng)度及對(duì)新鮮環(huán)境的好奇程度無明顯差異,所有大鼠均未被排除。Morris水迷宮測(cè)試成績(jī)顯示:與C組大鼠相比,D組和T2組大鼠逃避潛伏期明顯延長(zhǎng),中心區(qū)域穿

4、越次數(shù)減少(P＜0.05),T1組大鼠逃避潛伏期較D組明顯縮短,穿越中心區(qū)域次數(shù)增加(P＜0.05)。RT-PCR結(jié)果顯示:D組和T2組大鼠海馬神經(jīng)元CREB和BDNFmRNA表達(dá)水平明顯低于C組(P＜0.05),T1組大鼠海馬CREB和BDNFmRNA水平較D組增高(P＜0.05)。免疫組化實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:與C組大鼠海馬部位CREB、BDNF和p-CREB蛋白表達(dá)水平相比,D組和T2組明顯減少(P＜0,05),而T1組CREB、BDNF

5、和p-CREB表達(dá)水平接近于C組,較D組與T2組明顯升高(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1.STZ糖尿病組大鼠成模12周時(shí),Morris水迷宮測(cè)試成績(jī)下降,表現(xiàn)出認(rèn)知功能障礙。Ghrelin可以改善糖尿病大鼠認(rèn)知功能障礙。
　　 2.BDNF、CREB和p-CREB的差異性表達(dá)可能參與了糖尿病腦病的發(fā)生發(fā)展過程。
　　 3.Ghrelin改善糖尿病大鼠認(rèn)知功能障礙的部分機(jī)制與促進(jìn)CREB磷酸化,上

6、調(diào)海馬部位BDNF表達(dá)有關(guān)。
　　 第二部分Ghrelin對(duì)糖尿病大鼠認(rèn)知功能及海馬神經(jīng)元凋亡的影響
　　 目的:觀察Ghrelin對(duì)糖尿病大鼠海馬神經(jīng)元凋亡及其認(rèn)知功能的影響。
　　 方法:48只雄性SD大鼠隨機(jī)平均分為正常對(duì)照組(C組),糖尿病組(D組),糖尿病＋Ghrelin組(T1組)和糖尿?。獹hrelin＋D-lvs3-GHRP-6組(T2組),每組12只。建立STZ糖尿病模型,成模11周時(shí),open

7、-field實(shí)驗(yàn)排除合并抑郁癥的糖尿病大鼠。T1組大鼠側(cè)腦室注射Ghrelin200ng/只/天,T2組側(cè)腦室注射Ghrelin(200ng)＋D-lys3-GHRP-6(60μg/只/天)。C組和D組注射等體積生理鹽水。連續(xù)7天。Morris水迷宮測(cè)試各組大鼠學(xué)習(xí)與記憶能力。處死大鼠,心臟灌注留取大鼠海馬標(biāo)本。RT-PCR檢測(cè)大鼠海馬caspase-3mRNA的表達(dá),免疫組化檢測(cè)海馬神經(jīng)元caspase-3和BCL-x1蛋白表達(dá),原位

8、末端標(biāo)記法檢測(cè)海馬神經(jīng)元的凋亡情況。
　　 結(jié)果:Open-field實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:各組大鼠的活動(dòng)度及對(duì)新鮮環(huán)境的好奇程度無明顯差異,所有大鼠均未被排除。Morris水迷宮測(cè)試成績(jī)顯示:與C組大鼠相比,D組和T2組大鼠逃避潛伏期明顯延長(zhǎng),中心區(qū)域穿越次數(shù)減少(P＜0.05),T1組大鼠逃避潛伏期較D組明顯縮短,穿越中心區(qū)域次數(shù)增加(P＜0.05)。RT-PCR.結(jié)果顯示:D組和T2組海馬部位的caspase-3mRNA表達(dá)水平明

9、顯高于C組(P＜0.05),T1組大鼠海馬caspase-3mRNA水平較D組降低(P＜0.05)。免疫組化實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:與C組大鼠海馬部位caspase-3蛋白表達(dá)水平相比,D組和T2組明顯升高(P＜0.05),而T1組caspase-3表達(dá)水平接近于C組,較D組與T2組明顯降低(P＜0.05)。T1組BCL-x1蛋白表達(dá)顯著升高(P＜0.05),D組與T2組大鼠海馬神經(jīng)元BCL-x1蛋白表達(dá)較C組和T1組明顯下降(P＜0.05)。T

10、UNEL實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:D組和T2組大鼠海馬神經(jīng)元的凋亡增加了49％(P＜0.05),T1組大鼠海馬神經(jīng)元凋亡明顯低于D組與T2組(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1.糖尿病大鼠海馬神經(jīng)元caspase-3表達(dá)水平明顯升高,BCL-x1水平下降,海馬神經(jīng)元凋亡數(shù)量增加,并伴隨有認(rèn)知功能障礙,證實(shí)了神經(jīng)元的凋亡參與了糖尿病腦病的發(fā)病過程。
　　 2.Ghrelin改善糖尿病大鼠認(rèn)知功能的機(jī)制可能與下調(diào)caspa