經(jīng)鼻rhEPO對(duì)慢性腦缺血大鼠行為學(xué)及神經(jīng)元凋亡的影響.pdf

1、目的：
　　觀察人重組促紅細(xì)胞生成素（rhEPO）對(duì)大鼠慢性腦缺血后行為學(xué)及神經(jīng)元凋亡的影響，探索rhEPO在慢性腦缺血大鼠神經(jīng)保護(hù)作用的機(jī)制。
　　方法：
　　將60只健康雄性SD大鼠，隨機(jī)分為假手術(shù)組，2VO組（雙側(cè)頸總動(dòng)脈結(jié)扎），2VO+rhEPO組，2VO+rhEPO+AG490組（JAK2的特異性拮抗劑），2VO+AG490組(n=12)。采用雙側(cè)頸總動(dòng)脈結(jié)扎法（2VO）建立永久性慢性腦缺血模型。造模3天后給

2、藥，各組分別腹腔注射DMSO(AG490的溶媒)或AG490（5mg/kg），30min后鼻腔緩慢注入生理鹽水或rhEPO（150U/125μl），每周1次，共8次。第8次給藥結(jié)束24小時(shí)后行 Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)測(cè)試大鼠空間學(xué)習(xí)和記憶能力。行為學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，取標(biāo)本分別進(jìn)行 HE染色觀察神經(jīng)元形態(tài)學(xué)變化；免疫組化法檢測(cè) JAK2， P-JAK2(Tyr10071008)，STAT3，P-STAT3(Tyr705)，Bcl-2，Bax蛋

3、白的表達(dá)水平；原位末端標(biāo)記法（TUNEL）法檢測(cè)凋亡細(xì)胞數(shù)；實(shí)時(shí)定量RT-PCR檢測(cè)Bcl-2，Bax的mRNA的表達(dá)水平。
　　結(jié)果：
　　1.Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)測(cè)試結(jié)果：評(píng)價(jià)大鼠學(xué)習(xí)并獲取空間信息的能力和空間記憶能力。（1）定位航行實(shí)驗(yàn)：實(shí)驗(yàn)檢測(cè)到訓(xùn)練期間大鼠平均速度無(wú)顯著差異，且每天各組之間比較無(wú)明顯差異。隨著訓(xùn)練日期增加，5組大鼠平均逃避潛伏期明顯縮短，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=23.648，p<0.0001）；2

4、VO+rhEPO組逃避潛伏期較2VO組明顯縮短，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05），與假手術(shù)組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p>0.05）；2VO+rhEPO+AG490組逃避潛伏期較2VO+rhEPO組延長(zhǎng)，從第二天開(kāi)始兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）。2VO組，2VO+rhEPO+AG490組，2VO+AG490組逃避潛伏期差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p>0.05）。（2）空間探索實(shí)驗(yàn)：2VO+rhEPO組目標(biāo)象限停留時(shí)間與穿越平臺(tái)次數(shù)較2VO組均

5、明顯增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05），與假手術(shù)組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p>0.05）。2VO+rhEPO+AG490組目標(biāo)象限停留時(shí)間與穿越平臺(tái)次數(shù)均較2VO+rhEPO明顯縮短，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ p<0.05）。2VO組，2VO+rhEPO+AG490組，2VO+AG490組目標(biāo)象限停留時(shí)間、穿越平臺(tái)次數(shù)差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p>0.05）。2.HE染色結(jié)果顯示：假手術(shù)組神經(jīng)元形態(tài)學(xué)未見(jiàn)明顯缺血性改變，細(xì)胞結(jié)構(gòu)緊密，排列整齊。2

6、VO組神經(jīng)元缺失較多，殘留的神經(jīng)細(xì)胞邊緣模糊，排列松散不規(guī)則，胞漿皺縮,邊緣出現(xiàn)空泡，核深染，核固縮、核溶解。2VO+rhEPO組神經(jīng)元形態(tài)學(xué)有輕微改變，排列較整齊。2VO組，2VO+rhEPO+AG490組，2VO+AG490組，神經(jīng)元形態(tài)學(xué)改變類似。3.免疫組化及實(shí)時(shí)定量RT-PCR的結(jié)果：（1）與假手術(shù)組比較，2VO組中P-JAK2和P-STAT3表達(dá)增強(qiáng)，上調(diào)Bcl-2、Bax的表達(dá)(p<0.05)。(2)與2VO組比較，2VO

7、+rhEPO組增強(qiáng)P-JAK2、P-STAT3蛋白的表達(dá)，并上調(diào) Bcl-2的表達(dá)和下調(diào) Bax的表達(dá)(p<0.05)。(3)與2VO+rhEPO組比較，2VO+rhEPO+AG490組可抑制EPO誘導(dǎo)的P-JAK2、P-STAT3的表達(dá)，下調(diào)Bcl-2的表達(dá)和上調(diào)Bax的表達(dá)（p<0.05)。(4)2VO+AG490組中P-JAK2、P-STAT3、Bcl-2、Bax的表達(dá)與2VO組和2VO+rhEPO+AG490組組間比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差