細胞自噬和細胞凋亡在鄰苯二甲酸二丁酯對生殖結(jié)節(jié)發(fā)育影響中相關(guān)作用機制的研究.pdf

1、第一部分、DBP對SD大鼠生殖結(jié)節(jié)的發(fā)育及雄激素水平的影響
　　目的：鄰苯二甲酸二丁酯（dibutyl phthalate，DBP）是工農(nóng)業(yè)及生活用品上的常用塑化劑，可對環(huán)境造成污染。本實驗研究妊娠期暴露DBP對雄性子代生殖系統(tǒng)，尿道下裂發(fā)生率及雄激素水平的影響。
　　方法：將SD大鼠孕鼠隨機分為正常對照組和DBP組。懷孕13-19天，用灌胃法對DBP組孕鼠給予每天750毫克/千克體重溶于每只2ml玉米油的DBP，對照組給予

2、相應量的玉米油作安慰劑。孕第19天，用4％水合氯醛將孕鼠麻醉后，剖宮取出胎鼠，判斷性別并計數(shù)，稱量體重，測量生殖結(jié)節(jié)到肛門距離（anogenital distance，AGD），生殖結(jié)節(jié)的長度及直徑。對胎鼠生殖結(jié)節(jié)組織切片進行HE染色，光鏡觀察組織結(jié)構(gòu)。將胎鼠斷頭取血，離心，取血清，用酶聯(lián)免疫吸附法（Enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）監(jiān)測血清睪酮水平。
　　結(jié)果：DBP組子代雄性胎鼠和

3、雌性胎鼠的比例較正常對照組無明顯差異，但DBP組每窩活胎鼠個數(shù)的均數(shù)明顯低于正常對照組，有明顯統(tǒng)計學差異。DBP組子代胎鼠與正常對照組相比，AGD明顯縮短，AGD/體重比例、生殖結(jié)節(jié)體積及生殖結(jié)節(jié)體積/體重比例明顯減?。╬<0.05）。DBP組雄性胎鼠尿道下裂發(fā)生率為43.64%，正常對照組未見尿道下裂。DBP組雄性胎鼠血清睪酮水平較正常對照組明顯降低，具有明顯統(tǒng)計學差異（p<0.05）。
　　結(jié)論：孕期暴露DBP能誘導子代胎鼠尿

4、道下裂的發(fā)生，能明顯抑制雄性子代胎鼠血清睪酮的合成，對雄性子代胎鼠生殖結(jié)節(jié)的發(fā)育具有明顯影響。
　　第二部分、DBP對雄性SD大鼠胚胎期生殖結(jié)節(jié)自噬及凋亡的影響及機制
　　目的：研究孕期暴露DBP對雄性子代SD大鼠生殖結(jié)節(jié)細胞自噬和細胞凋亡的影響，進一步探討孕期暴露DBP對雄性子代SD大鼠生殖結(jié)節(jié)細胞自噬相關(guān)通路的調(diào)控。
　　方法：尿道下裂實驗動物模型的建立同第一部分。孕第19天，取DBP組中的尿道下裂胎鼠及正常對照組

5、中胎鼠的生殖結(jié)節(jié)，制作冰凍切片，用TUNEL染色法檢測生殖結(jié)節(jié)細胞的凋亡情況；取子代雄性尿道下裂及正常對照組中胎鼠的生殖結(jié)節(jié)制作超薄切片，用透射電鏡法觀察生殖結(jié)節(jié)細胞中自噬結(jié)構(gòu)的改變；取尿道下裂及正常對照組胎鼠的生殖結(jié)節(jié)，提取總蛋白，用免疫印跡法檢測生殖結(jié)節(jié)組織中的自噬標記蛋白（LC3，P62）以及自噬通路關(guān)鍵蛋白(Akt,p-Akt,p-mTOR,p-S6,Beclin-1)。
　　結(jié)果：與正常對照組比較，尿道下裂組生殖結(jié)節(jié)中T

6、UNEL染色陽性細胞數(shù)明顯增多；自噬相關(guān)蛋白LC3-II/LC3-I的比例顯著增高；p62蛋白表達明顯減少，均具有明顯統(tǒng)計學差異（p<0.05），而兩組Beclin-1的表達無統(tǒng)計學差異。通過透射電鏡在尿道下裂胎鼠生殖結(jié)節(jié)中發(fā)現(xiàn)大量自噬小體及自噬溶媒體，而正常對照組中相對少見。尿道下裂組p-Akt,p-mTOR,p-S6蛋白明顯較正常對照組減少，而Akt的蛋白表達在兩組中無明顯差異（p<0.05）。
　　結(jié)論：孕期DBP的暴露能夠