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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:
皮膚損傷愈合是一個(gè)復(fù)雜而連續(xù)的過(guò)程,其大致可以分為三個(gè)階段:炎癥期、增殖期和重建修復(fù)期,其各階段是相互聯(lián)系,相互影響的,有大量細(xì)胞、細(xì)胞因子和炎癥介質(zhì)的參與其間。Ⅱ型大麻素受體(cannabinoid receptor type 2,CB2R)為G蛋白偶聯(lián)受體,能激活多種信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路,主要分布于外周,如免疫系統(tǒng)和造血細(xì)胞。新近研究發(fā)現(xiàn)CB2R與多種不同疾病和組織損傷有關(guān),發(fā)揮重要的抗炎和抗纖維化的作用。本研究應(yīng)用免
2、疫組織化學(xué)染色和Western blot技術(shù),檢測(cè)小鼠皮膚損傷區(qū)在損傷后不同時(shí)間CB2R表達(dá)的變化情況,探討CB2R在皮膚損傷愈合中的作用及其在損傷時(shí)間推斷上應(yīng)用的可能性。
實(shí)驗(yàn)材料與方法:
健康成年清潔級(jí)昆明系小鼠50只,體質(zhì)量35g~40g,隨機(jī)分為10組,每組5只,其中1組為正常對(duì)照組。乙醚氣體吸入麻醉,背部剪毛處理后,常規(guī)手術(shù)消毒,在背部中央做一縱行長(zhǎng)1.5cm皮膚全層切口,深達(dá)筋膜,分別于傷后0h,
3、6h,12h,1d,3d,5d,7d,10d和14d將小鼠脫頸椎處死,取傷口處1.5cmx1.0cm皮膚組織,對(duì)照組小鼠取相同部位同等大小皮膚,以備HE染色、免疫組織化學(xué)染色和Western blot蛋白印跡技術(shù)應(yīng)用。應(yīng)用免疫組織化學(xué)和Western blot方法檢測(cè)50例小鼠皮膚切創(chuàng)后不同時(shí)間CB2R變化情況,以非切創(chuàng)小鼠皮膚組織作對(duì)照,顯微鏡x400倍下,在損傷區(qū)及損傷周邊區(qū)隨機(jī)選取10個(gè)視野,計(jì)數(shù)細(xì)胞總數(shù)、陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)及陽(yáng)性細(xì)胞率。
4、應(yīng)用Fluochem V2.0軟件測(cè)各片段的平均光密度值,測(cè)得數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示。用SPSS13.0 for Windows進(jìn)行單因素方差分析,以P<0.05為差異有顯著性意義。
結(jié)果:
免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示,對(duì)照組CB2R表達(dá)于表皮、毛囊、皮脂腺、皮肌層、血管平滑肌、神經(jīng)纖維外膜及神經(jīng)纖維束束膜;傷后6h切創(chuàng)皮膚損傷區(qū)及周邊區(qū)多核粒細(xì)胞少量表達(dá)CB2R,12h-24h以單個(gè)核細(xì)胞陽(yáng)性表達(dá)為主,
5、3d以單個(gè)核細(xì)胞和梭形成纖維細(xì)胞表達(dá)為主,5d-14d以梭形成纖維細(xì)胞為主。CB2R陽(yáng)性細(xì)胞率于0h-3d逐漸升高,5d達(dá)最高峰,隨后逐漸下降。經(jīng)Western blotting檢測(cè)顯示,對(duì)照及各個(gè)損傷時(shí)間段都有CB2R陽(yáng)性條帶,其中5d為CB2R表達(dá)高峰。
結(jié)論:
小鼠皮膚切創(chuàng)愈合過(guò)程中,CB2R于損傷區(qū)及周邊區(qū)多核粒細(xì)胞、單個(gè)核細(xì)胞、成纖維細(xì)胞中表達(dá),并具有規(guī)律性,提示CB2R可能參與皮膚損傷愈合,并可用
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