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文檔簡介
1、目的:
皮膚損傷愈合是一個復雜而連續(xù)的過程,其大致可以分為三個階段:炎癥期、增殖期和重建修復期,其各階段是相互聯(lián)系,相互影響的,有大量細胞、細胞因子和炎癥介質的參與其間。Ⅱ型大麻素受體(cannabinoid receptor type 2,CB2R)為G蛋白偶聯(lián)受體,能激活多種信號轉導通路,主要分布于外周,如免疫系統(tǒng)和造血細胞。新近研究發(fā)現(xiàn)CB2R與多種不同疾病和組織損傷有關,發(fā)揮重要的抗炎和抗纖維化的作用。本研究應用免
2、疫組織化學染色和Western blot技術,檢測小鼠皮膚損傷區(qū)在損傷后不同時間CB2R表達的變化情況,探討CB2R在皮膚損傷愈合中的作用及其在損傷時間推斷上應用的可能性。
實驗材料與方法:
健康成年清潔級昆明系小鼠50只,體質量35g~40g,隨機分為10組,每組5只,其中1組為正常對照組。乙醚氣體吸入麻醉,背部剪毛處理后,常規(guī)手術消毒,在背部中央做一縱行長1.5cm皮膚全層切口,深達筋膜,分別于傷后0h,
3、6h,12h,1d,3d,5d,7d,10d和14d將小鼠脫頸椎處死,取傷口處1.5cmx1.0cm皮膚組織,對照組小鼠取相同部位同等大小皮膚,以備HE染色、免疫組織化學染色和Western blot蛋白印跡技術應用。應用免疫組織化學和Western blot方法檢測50例小鼠皮膚切創(chuàng)后不同時間CB2R變化情況,以非切創(chuàng)小鼠皮膚組織作對照,顯微鏡x400倍下,在損傷區(qū)及損傷周邊區(qū)隨機選取10個視野,計數(shù)細胞總數(shù)、陽性細胞數(shù)及陽性細胞率。
4、應用Fluochem V2.0軟件測各片段的平均光密度值,測得數(shù)據(jù)用均數(shù)±標準差(x±s)表示。用SPSS13.0 for Windows進行單因素方差分析,以P<0.05為差異有顯著性意義。
結果:
免疫組織化學結果顯示,對照組CB2R表達于表皮、毛囊、皮脂腺、皮肌層、血管平滑肌、神經纖維外膜及神經纖維束束膜;傷后6h切創(chuàng)皮膚損傷區(qū)及周邊區(qū)多核粒細胞少量表達CB2R,12h-24h以單個核細胞陽性表達為主,
5、3d以單個核細胞和梭形成纖維細胞表達為主,5d-14d以梭形成纖維細胞為主。CB2R陽性細胞率于0h-3d逐漸升高,5d達最高峰,隨后逐漸下降。經Western blotting檢測顯示,對照及各個損傷時間段都有CB2R陽性條帶,其中5d為CB2R表達高峰。
結論:
小鼠皮膚切創(chuàng)愈合過程中,CB2R于損傷區(qū)及周邊區(qū)多核粒細胞、單個核細胞、成纖維細胞中表達,并具有規(guī)律性,提示CB2R可能參與皮膚損傷愈合,并可用
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