大花三色堇再生體系的優(yōu)化與三色堇多倍體誘導(dǎo)的初步研究.pdf

1、三色堇(V.tricolor L.)原產(chǎn)歐洲,為堇菜科堇菜屬多年生草本,具有耐熱、早花、多花等優(yōu)良性狀,為目前園林中廣泛栽培應(yīng)用的大花三色堇的主要雜交親本之一。大花三色堇是重要的花壇花卉,市場需求量很大。
　　 大花三色堇的F1代制種耗費大量人力物力,可利用雄性不育系降低生產(chǎn)成本。本試驗擬通過轉(zhuǎn)基因研究創(chuàng)造雄性不育系而加快育種進程,而高效、穩(wěn)定的再生體系是遺傳轉(zhuǎn)化體系的前提,本文圍繞再生體系的優(yōu)化進行了相關(guān)研究；為創(chuàng)造抗逆性強、

2、觀賞價值高的新品種,本文對三色堇的多倍體誘導(dǎo)進行了初步研究。研究結(jié)果如下:
　　 1.本文針對不同因素(基本培養(yǎng)基、瓊脂濃度、蔗糖濃度、激素配比、活性炭)對大花三色堇的增殖和玻璃化的影響進行了相關(guān)研究,得到在含8 g/L瓊脂、30 g/L蔗糖、0.5 mg/LBA+0.05 mg/L NAA的MS培養(yǎng)基上玻璃化現(xiàn)象得到緩解。通過觀察發(fā)現(xiàn),高溫和光照不足是影響無菌苗玻璃化的主要因為,所以組培室內(nèi)應(yīng)設(shè)有降溫措施,無菌苗應(yīng)單層等距離擺

3、放,用透氣性好又透光的封口膜。
　　 2.在前人的基礎(chǔ)上,以大花三色堇22-8無菌苗的節(jié)間莖段為外植體,研究不同基本培養(yǎng)基(MS、1/2MS、改良MS、B5)對大花三色堇再生的影響,得出1/2MS基本培養(yǎng)基上再生率最高；考慮TDZ或BA和NAA組合對再生的影響,得出用1/2MS+1.0 mg/L TDZ+0.1mg/L NAA的配方時再生率最高,達到66.7％；加活性炭抑制其再生；暗培5d有利于大花三色堇的再生。繼代苗退化嚴重,

4、再生率急劇下降。
　　 3.(1)用露白種子浸泡法和莖尖滴定法兩種方法進行多倍體誘導(dǎo)實驗。得出種子對秋水仙素很敏感,大部分種子在秋水仙素溶液中浸泡后受毒害死亡,只有在很低的濃度0.05％下才有植株成活。采用莖尖滴定處理的一組,隨著濃度的升高、時間的延長,成活率降低,而變異率沒有相應(yīng)的規(guī)律。相同0.5％濃度下處理2天時變異率最高,為71.4％；相同時間3天時濃度為0.5％的變異率最高,為73.7％。
　　 (2)多倍體的鑒