油莎豆再生體系的建立及多倍體誘導(dǎo).pdf

1、本研究主要對油莎豆莖尖培養(yǎng)、愈傷組織的誘導(dǎo)與植株再生、組織培養(yǎng)中的褐化問題、無菌苗的移栽和栽培管理、秋水仙素誘導(dǎo)產(chǎn)生多倍體等方面進行了探討，建立了油莎豆離體培養(yǎng)體系，包括油莎豆的消毒、無菌苗的獲得、外植體的選擇、最優(yōu)培養(yǎng)基與培養(yǎng)方式的選擇、無根苗的生根與移栽、無菌苗的栽培管理以及油莎豆愈傷組織誘導(dǎo)和形態(tài)學(xué)觀察、秋水仙素誘導(dǎo)的最適條件、多倍體的鑒定等；主要研究結(jié)果如下： 1，油莎豆再生體系的建立以無菌培養(yǎng)的莖段、葉片、根做為外植體

2、，通過不同激素配比，不同培養(yǎng)方式的比較，來篩選莖尖誘導(dǎo)、生根培養(yǎng)、愈傷組織誘導(dǎo)的最佳培養(yǎng)基；選取不同外植體，來探尋誘導(dǎo)愈傷組織的最佳材料；通過添加不同褐變抑制劑、選用不同培養(yǎng)方式，來降低抑制油莎豆組織培養(yǎng)中的褐變發(fā)生率。試驗結(jié)果表明：外植體用70％的酒精浸泡1min，再用10％NaCIO浸泡40min，或用70％的酒精浸泡1min，再用0.2％升汞浸泡40min，最后無菌水沖洗5次以上，所獲得的消毒效果最好；莖尖誘導(dǎo)最優(yōu)培養(yǎng)基為MS+6

3、BA0.5㎎/L+TDZ0.5㎎/L+ZT0.5㎎/L+3％蔗糖+0.7％瓊脂(PH5.8)；愈傷組織誘導(dǎo)最佳培養(yǎng)基MS+2，4-D3.0㎎/L+KT1.0㎎/L+6BA0.5㎎/L+NAA0.5㎎/L+600-800mg/LCH3％蔗糖+0.7％瓊脂(PH5.8)；只有切取的莖段基部能誘導(dǎo)出愈傷組織。油莎豆抑制褐變的有效方法是在培養(yǎng)墓中添加高濃度2，4-D和4g/LPVP，并且黑暗條件下培養(yǎng)兩周；最佳生根培養(yǎng)基是1/2MS+IBA0.

4、2㎎/L+3％蔗糖+0.7％瓊脂(PH5.8)，組培苗在轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基十天后，生根率可達100％；將培養(yǎng)瓶中的小苗煉苗2天后，移入花盆中，存活率可達85％。 2.油莎豆塊莖采收后即使在適宜條件下也不能正常萌發(fā)，在4℃下貯藏1-2周后，方可萌發(fā)。因為油莎豆在冬季存在休眠現(xiàn)象，不同溫度的交替貯藏，在一定范圍內(nèi)可以促進塊莖休眠的解除。 3.秋水仙素是人工誘導(dǎo)多倍體的主要化學(xué)物質(zhì)，用于處理的植物材料和處理方法很多，其中以成熟種子

5、為材料進行染色體加倍是最為常用的方法。近年來，隨著植物組織培養(yǎng)技術(shù)的發(fā)展和完善，利用離體組織染色體加倍法進行多倍體誘導(dǎo)已在許多植物中取得成果。而要利用組織培養(yǎng)對離體組織進行染色體加倍，首先要建立高效的組織培養(yǎng)再生體系。油莎豆多倍體的誘導(dǎo)以0.2％的秋水仙素水溶液浸泡處理油莎豆莖尖48h能獲得理想的存活率和誘導(dǎo)率，誘導(dǎo)率達43.7％，存活率為44.4％。對油莎豆二倍體和多倍體的氣孔進行了觀察比較發(fā)現(xiàn)多倍體與二倍體相比，氣孔長度減少了5.8