擬南芥核小體組裝蛋白功能的研究.pdf

1、核小體組裝蛋白(NAP1)是真核生物中非常保守的、在體外能夠促進(jìn)核小體組裝的一種組蛋白分子伴侶。它通過幫助核心組蛋白沉積到DNA上從而促使染色體組裝。在酵母和動物中的研究表明，NAP1除了具有核小體組裝的功能之外，NAP1還在細(xì)胞有絲分裂以及微管動力學(xué)調(diào)節(jié)過程中發(fā)揮功能。從NAP1具有的功能來看，這類蛋白質(zhì)應(yīng)該定位在細(xì)胞核中，通過檢測YFP融合的擬南芥NAP1在煙草BY2細(xì)胞中的定位發(fā)現(xiàn)，擬南芥NAP1家族的其中三個成員AtNAP1-L

2、1、AtNAP1-L2、AtNAP1-L3均定位在細(xì)胞質(zhì)中。為了更進(jìn)一步研究擬南芥NAP1的功能，應(yīng)用大腸桿菌表達(dá)體系，表達(dá)了AtNAP1-L1、AtNAP1-L2、AtNAP1-L3這三個蛋白質(zhì)，并對表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行了分離純化。在體外檢測這三個蛋白質(zhì)被大腸桿菌表達(dá)的蛋白質(zhì)激酶OsCK2α磷酸化狀況時發(fā)現(xiàn)，只有AtNAP1-L1和AtNAP1-L2能被微弱地磷酸化，而AtNAP1-L3完全不能被磷酸化，這就暗示著雖然這三個蛋白質(zhì)問有高度的同

3、源性，但它們之間可能會有功能上的差異性。有關(guān)NAP1功能的研究剛剛起步，目前得到的許多關(guān)于NAP1功能的信息大部分來源于體外，對于NAP1在體內(nèi)的功能還不是很明確。通過篩選擬南芥AtNAP1-L1、AtNAP1-L2和AtNAP1-L3三個NAP1家族蛋白質(zhì)功能缺失突變體，觀察NAP1缺失后突變體植株的表型，可以了解NAP1蛋白在體內(nèi)的功能。用AtNAP1-L2的T-DNA插入突變純合子和AtNAP1-L3的T-DNA插入突變純合子雜交