褐飛虱flightin和TnC4基因初步分析.pdf

1、褐飛虱是我國(guó)水稻上最重要的害蟲(chóng)之一，具有翅二型性。Flightin和TroponinC4(TnC4)都是昆蟲(chóng)肌肉組成相關(guān)蛋白，其中flightin最初是在果蠅間接飛行?。╥ndirect flight muscle，IFM）上被發(fā)現(xiàn)，它與肌漿球蛋白(myosin)緊密結(jié)合，指導(dǎo)粗肌絲的正確組裝，對(duì)肌肉伸展活性具有重要作用。TnC4是TroponinC的一種亞型，專(zhuān)門(mén)與Ca2+結(jié)合，促進(jìn)肌動(dòng)蛋白和肌球蛋白互作，從而使肌肉發(fā)生收縮。這兩種蛋

2、白對(duì)維持肌肉的結(jié)構(gòu)和功能起到了重要的作用，但其在褐飛虱長(zhǎng)、短翅間的表達(dá)差異和功能并不清楚。本研究以褐飛虱cDNA為模板，通過(guò)PCR和3’RACE克隆得到褐飛flightin基因ORF，長(zhǎng)度為630bp，可編碼含209個(gè)氨基酸殘基的蛋白，預(yù)測(cè)分子量為25.49kDa;同時(shí)克隆了TnC4基因，ORF為459bp，可編碼含152個(gè)氨基酸殘基的多肽，預(yù)測(cè)分子量17.42kDa。氨基酸同源性比對(duì)發(fā)現(xiàn)，flightin相對(duì)保守，TnC4高度保守，且

3、在N末端保守區(qū)域有1個(gè)Ca2+結(jié)合位點(diǎn)。通過(guò)原核表達(dá)ightin和TnC4基因，回收蛋白分別制備了2個(gè)蛋白的多克隆抗體。我們利用RT-PCR、western blot等技術(shù)發(fā)現(xiàn)flightin和TnC4在長(zhǎng)翅褐飛虱中表達(dá)量明顯大于短翅中的表達(dá)量，且二者都從成蟲(chóng)期開(kāi)始表達(dá)，主要位于胸部組織中。免疫熒光定位實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步表明，flightin和TnC4僅存在于胸部IFM組織中。通過(guò)顯微注射的方法對(duì)3齡褐飛虱進(jìn)行RNA interference（