艾地苯醌對缺血再灌注視網膜損傷的作用觀察.pdf

1、目的:
　　視網膜缺血再灌注損傷(Retina ischemia-reperfusion injury, RIRI)是臨床上主要致盲性眼病共同的病理生理過程，如青光眼、視網膜中央動脈阻塞、糖尿病性視網膜病變等。其可通過誘導視網膜神經節(jié)細胞(RGCs)凋亡導致失明，其中線粒體功能障礙引起的氧化應激及凋亡相關蛋白的表達和釋放是重要機制之一。輔酶Q10是線粒體電子傳遞鏈中必不可少的輔助因子和強效的抗氧化劑，在神經退行性疾病中對神經元細胞

2、的氧化應激損傷有明顯的保護作用。艾地苯醌是一種已經應用于臨床的線粒體功能靶向藥物，與輔酶Q10有類似的醌環(huán)結構，但較輔酶Q10有更強的水溶性，易于被人體所吸收。艾地苯醌在治療腦血管疾病以及遺傳性線粒體功能障礙性疾病中的抗氧化和神經保護作用已經得到證實。本研究通過提高前房灌注壓制作大鼠缺血再灌注模型，艾地苯醌干預并檢測細胞色素C(Cytochrome C)、Caspase-3表達及RGCs計數，來探索艾地苯醌在RIRI中的作用，從而為治療

3、青光眼、糖尿病性視網膜病變等RIRI疾病提供新的治療思路。
　　方法:
　　健康雄性SD大鼠隨機分為3組:空白對照組，實驗對照組，實驗治療組。HE染色觀察再灌注12h，24h，48h,72h視網膜組織形態(tài)改變并利用免疫組織化學方法檢測caspase-3表達。Western-blot方法檢測再灌注24h Cytochrome C表達。利用免疫組織熒光方法檢測再灌注7d后，Thy1-1標記RGCs并計數。SPSS21.0軟件進行

4、數據分析，定量結果用(x)±s表示，界定P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。
　　結果:
　　1.HE觀察大鼠視網膜形態(tài)及結構改變:空白對照組視網膜組織結構清晰;實驗對照組視網膜水腫，結構紊亂，神經節(jié)細胞層細胞數量明顯減少;與實驗對照組相比，實驗治療組大鼠視網膜結構較完整，水腫程度輕，神經節(jié)細胞層細胞數量也較多。
　　2.免疫組化:空白對照組視網膜各層caspase-3幾乎無表達;實驗對照組Caspase-3表達明顯增加

5、;實驗治療組較實驗對照組Caspase-3表達減少。Caspase-3表達主要集中在神經節(jié)細胞層及內核層，隨時間變化呈現先增高、后降低趨勢，24h組Caspase-3表達量最高。各時間亞組差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　3.Western-blot:空白對照組Cytochrome C表達微弱，實驗對照組CytochromeC表達迅速增加，實驗治療組較實驗對照組Cytochrome C表達減少。經統(tǒng)計學分析差異有統(tǒng)計學意義(

6、P＜0.05)。
　　4.免疫熒光:空白對照組RGCs計數結果為15.90±1.20個/視野;實驗對照組RGCs明顯減少，計數結果為7.70±2.31個/視野;實驗治療組RGCs較實驗對照組增多，計數結果為10.70±2.11個/視野。經統(tǒng)計學分析差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　結論:
　　1.提高前房灌注壓制作視網膜缺血再灌注模型可導致大鼠視網膜Cytochrome C、Caspase-3表達增多，RGCs存