美滿霉素對(duì)大鼠缺血再灌注損傷作用的觀察.pdf

1、目的：通過觀察美滿霉素對(duì)大鼠缺血再灌注腦損傷后神經(jīng)功能損傷、大腦海馬CA1區(qū)細(xì)胞凋亡和對(duì)Caspase-3和PARP-1蛋白表達(dá)的影響，探討美滿霉素對(duì)缺血性腦損傷的保護(hù)作用。
　　 方法：健康雄性SD大鼠108只，隨機(jī)分為假手術(shù)組(n=36)、缺血再灌注模型組(n=36)和美滿霉素治療組(n=36)。美滿霉素治療組根據(jù)用藥時(shí)間不同分為24h組(n=18)和72h組(n=18)，假手術(shù)組和模型組也同樣各分為24h組(n=18)和7

2、2h組(n=18)。除假手術(shù)組外，其余各組采用線栓法制作缺血再灌注模型。美滿霉素治療組是在大鼠缺血再灌注后，立即腹腔注射美滿霉素(45mg/kg)，之后按每隔12h腹腔注射(22.5mg/kg)，以穩(wěn)定體內(nèi)血藥濃度，直至處死。假手術(shù)組和缺血再灌注模型組同時(shí)間行等劑量生理鹽水注射。大鼠蘇醒后立即對(duì)其進(jìn)行大鼠神經(jīng)病學(xué)評(píng)分；用水迷宮測試、跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)觀察大鼠的學(xué)習(xí)和記憶功能的變化；TTC染色法觀察大鼠腦缺血再灌注后腦梗塞體積的變化；HE染色進(jìn)行組

3、織學(xué)觀察；TUNEL染色觀察細(xì)胞凋亡的情況；免疫組化和Western blot檢測大鼠海馬區(qū)PARP-1和Caspase-3蛋白的表達(dá)變化。
　　 結(jié)果：(1)在注射藥品之前，通過神經(jīng)病學(xué)評(píng)分，假手術(shù)組：全部為0分。缺血再灌注模型組：2.25±0.44分。做缺血再灌注模型的大鼠出現(xiàn)明顯的神經(jīng)功能的癥狀。(2)通過水迷宮測試發(fā)現(xiàn)，治療1天和3天的假手術(shù)組的逃避潛伏期(秒)為61.5±10.6和65.5±11.2；治療1天和3天的缺

4、血再灌注模型組的逃避潛伏期(秒)為161.7±7.0和140.8±7.8；治療1天和3天的美滿霉素治療組的逃避潛伏期(秒)為120.7±9.2和97.3±6.6。美滿霉素治療組與缺血再灌注模型組相比，逃避潛伏期明顯縮短(P<0.05)。(3)通過跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)表明，治療1天和3天的假手術(shù)組的記憶潛伏期(秒)為241.3±22.5和218.0±25.8，錯(cuò)誤次數(shù)為3.3±1.8和3.7±1.4；治療1天和3天的缺血再灌注模型組的記憶潛伏期(秒)

5、為81.5±13.4和86.8±14.1，錯(cuò)誤次數(shù)為9.0±1.8和8.0±1.8；治療1天和3天的美滿霉素治療組的記憶潛伏期(秒)為166.0±17.8和125.2±13.8，錯(cuò)誤次數(shù)為6.0±1.4和5.2±2.1。美滿霉素治療組與缺血再灌注模型組相比，潛伏期明顯延長，錯(cuò)誤次數(shù)減少，有顯著差異(P<0.05)。(4)TTC檢測發(fā)現(xiàn)，治療1天和3天的假手術(shù)組的梗塞體積(mm3)都是0；治療1天和3天的缺血再灌注模型組的梗塞體積(mm3

6、)為0.29±0.02和0.25±0.01；治療1天和3天的美滿霉素治療組的梗塞體積(mm3)為0.15±0.01和0.13±0.01。美滿霉素治療組的腦梗塞體積與缺血再灌注模型組相比，梗塞體積明顯減少(P<0.05)。(5)HE染色發(fā)現(xiàn)，美滿霉素治療組大鼠海馬CA1區(qū)的神經(jīng)元與缺血再灌注模型組相比，數(shù)量明顯增多。(6)通過TUNEL檢測發(fā)現(xiàn)，治療1天和3天的假手術(shù)組的凋亡系數(shù)(％)為1.73±0.62和2.37±0.51；治療1天和3

7、天的缺血再灌注模型組的凋亡系數(shù)(％)為55.43±0.62和46.10±1.99；治療1天和3天的美滿霉素治療組的凋亡系數(shù)(％)為22.67±2.43和15.63±1.30。美滿霉素治療組的大鼠海馬CA1區(qū)的凋亡細(xì)胞與缺血再灌注模型組相比，明顯減少，有顯著差異(P<0.05)。(7)免疫組織化學(xué)檢測發(fā)現(xiàn)，美滿霉素治療組大鼠海馬CA1區(qū)的Caspase-3和PARP-1蛋白的表達(dá)與缺血再灌注模型組相比，明顯減少。(8)通過Western

8、blot檢測Caspase-3蛋白發(fā)現(xiàn)，治療1天和3天的假手術(shù)組的灰度值為0.38±0.07和0.23±0.04；治療1天和3天的缺血再灌注模型組的灰度值為0.71±0.04和0.76±0.04；治療1天和3天的美滿霉素治療組的灰度值為0.47±0.02和0.38±0.02。檢測PARP-1蛋白發(fā)現(xiàn)，治療1天和3天的假手術(shù)組的灰度值為0.49±0.07和0.45±0.04；治療1天和3天的缺血再灌注模型組的灰度值為1.49±0.03和1