急性壞死性胰腺炎胰腺組織中褪黑素受體表達(dá)及褪黑素干預(yù)作用.pdf

1、目的：探討急性壞死性胰腺炎(acutenecrotizingpancreatitis，ANP)胰腺組織中褪黑素受體(melatoninreceptor1，MR1)表達(dá)及褪黑素(melatonin，MT)干預(yù)作用。
　　 方法：
　　 1．健康雄性SD大鼠54只，質(zhì)量200-250g，實(shí)驗(yàn)前禁食12小時(shí)，自由進(jìn)水。將大鼠隨機(jī)分成3組：假手術(shù)組(shamoperation，SO)，急性壞死性胰腺炎組(acutenecroti

2、zingpancreatitis，ANP)，褪黑素干預(yù)SAP組(MTpretreated，MT)。每組各18只。
　　 2．誘導(dǎo)ANP:腹腔注射5％水合氯醛(0.3ml/100g)麻醉動(dòng)物后剖腹，采用逆行胰膽管注射法。SO組翻動(dòng)十二指腸、胰腺組織數(shù)次，ANP組勻速注入4％?；悄懰徕c(0.1ml/100g)，MT組在誘導(dǎo)ANP前30min經(jīng)腹腔注射4％MT(50mg/kg)，常規(guī)關(guān)腹，動(dòng)物造模后于背部皮下分點(diǎn)注射2.0mL無(wú)菌生理

3、鹽水，補(bǔ)充水分。
　　 3．各組大鼠分別于術(shù)后第4h、8h、12h（各組各時(shí)間點(diǎn)6只）3個(gè)時(shí)點(diǎn)由下腔靜脈取血5-8ml，低溫離心（3000r/min、10分鐘、4℃），留取上層血清于-20℃冰箱保存待測(cè)淀粉酶。迅速取出胰腺組織：一部分置于去RNA酶凍存管中，置-80℃冰箱保存，待行實(shí)時(shí)定量PCR;一部分經(jīng)4％多聚甲醛固定待行病理檢查和免疫組化；剩余組織制備組織勻漿，測(cè)定氧化指標(biāo)。心臟穿刺取血處死大鼠。
　　 4．胰腺組織

4、常規(guī)行病理學(xué)(HE染色法)檢查及評(píng)分。
　　 5．檢測(cè)血清淀粉酶（AMY），測(cè)定胰腺組織中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)及腫瘤壞死因子α(TNF-α)的含量，免疫組織化學(xué)SABC法定性檢測(cè)胰腺組織中MR1蛋白的表達(dá)，實(shí)時(shí)定量(Rea1-Time)PCR檢測(cè)胰腺組織中MR1mRNA的表達(dá)水平。
　　 6．統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，所有數(shù)據(jù)以x±s表示，進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)和方差齊性分析，采用t檢

5、驗(yàn)、完全隨機(jī)設(shè)計(jì)單因素方差分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果：成功建立大鼠ANP模型。
　　 1．胰腺組織病理同SO組比較，ANP組各時(shí)點(diǎn)胰腺組織均有不同程度的病理?yè)p害，且隨時(shí)間延長(zhǎng)病變呈進(jìn)行性加重，MT組胰腺病理?yè)p害較相應(yīng)時(shí)點(diǎn)ANP組顯著減輕（P＜0.05）。
　　 2．血清淀粉酶同SO組比較，ANP組和MT組血清淀粉酶增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；MT組血清淀粉酶較相應(yīng)時(shí)點(diǎn)ANP組下

6、降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　 3．胰腺組織中MDA、TNF-α、SOD的水平MDA、TNF-α水平在ANP組較SO組明顯增高(P＜0.05或P＜0.01)，而MT組較相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)ANP組顯著降低(P＜0.05)。SOD水平在ANP組各時(shí)點(diǎn)較SO組顯著降低(P＜0.01)，而MT組較ANP組顯著升高(P＜0.05)。
　　 4．胰腺組織中MR1蛋白及MR1mRNA表達(dá)與SO組相比，MR1蛋白及MR1mRNA表