褪黑素干預(yù)重癥急性胰腺炎腎損傷及褪黑素受體表達.pdf

1、目的：研究褪黑素(melatonin，MT)對重癥急性胰腺炎(severeacutepancreatitis，SAP)的大鼠腎組織損傷的干預(yù)作用及其褪黑素受體(melatoninreceptor1，MR1)的表達。
　　 方法：
　　 1．健康雄性SD大鼠36只，質(zhì)量200-250g，實驗前禁食12小時，自由進水。36只SD大鼠隨機分為假手術(shù)組(SO組)、重癥急性胰腺炎組(SAP)和褪黑素干預(yù)組(MT)，每組12只。應(yīng)用

2、胰膽管內(nèi)注射?；悄懰徕c的方法誘導(dǎo)SAP模型，MT組于誘導(dǎo)模型前30分鐘皮下注射褪黑素。常規(guī)關(guān)腹，動物造模后于背部皮下分點注射2.0mL無菌生理鹽水，補充水分。
　　 2．造模成功后4、12h2個時點處死大鼠，各個時點各組6只。各時點由下腔靜脈抽取大鼠靜脈血液8～10ml，離心后留取上層血清，置-20℃冰箱保存?zhèn)溆?。取新鮮胰腺組織右側(cè)腎臟組織，一部分固定于4％多聚甲醛液中，待行組織病理學(xué)和免疫組織化學(xué)法檢測；另一部分置凍存管中于液

3、氮中保存，進行相關(guān)檢測。
　　 3．測定血清檢測血清中淀粉酶、尿素氮、肌酐含量，酶聯(lián)免疫吸附分析法(ELISA)檢測腎組織腫瘤壞死因子-α(TNF-α)，比色法檢測腎組織脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)，用RT-PCR檢測腎組織褪黑素受體1(MR1)表達情況，用SABC免疫組織化學(xué)法檢測腎臟MR1蛋白表達情況，并行胰腺及腎臟的病理檢查。
　　 4．統(tǒng)計學(xué)方法：所有數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（-x±s）表示

4、，以SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行分析處理，多組樣本均數(shù)比較進行方差齊性檢驗，組間比較采用單因素方差分析。方差齊性者兩兩比較采用LSD法，方差不齊者進行Dunnet'sT3檢驗。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 結(jié)果：
　　 大鼠AP模型建立成功。
　　 1．SAP組4h、12h血清淀粉酶、尿素氮、肌酐水平較SO組明顯升高（P均＜0.01），腎組織各時點MDA、TNF-α水平較SO組明顯升高（P均＜0.01

5、），SOD較SO組明顯降低（P均＜0.01），MR1mRNA表達較SO組明顯降低(P＜0.01)；
　　 2MT組4h、12h血清淀粉酶、12h尿素氮、肌酐水平較SAP組明顯降低(P均＜0.05)，腎組織各時點MDA、TNF-α水平較SAP組明顯降低(P均＜0.05)，SOD較SAP組明顯升高（P均＜0.05），MR1mRNA表達較SAP組明顯升高(P＜0.01)，
　　 3MT組腎臟及胰腺病理損傷較SAP組減輕，MR1