

版權說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權,請進行舉報或認領
文檔簡介
1、熱休克蛋白家族成員中的分子量為90kD的熱休克蛋白(Hsp90)是真核細胞中最豐富的蛋白質(zhì)之一.Hsp90能使在熱休克等應激反應中積累的誤折疊蛋白重新折疊,并可促進已變性的蛋白質(zhì)降解.Hsp90還參與激素受體、某些轉錄因子、信號途徑和翻譯起始階段的激酶及一氧化氮合酶的成熟、胞內(nèi)轉運和活性調(diào)節(jié).因此Hsp90在真核細胞中有著廣泛而重要的功能.利用含有GAGA元件核心序列的寡核苷酸片段作探針,與42℃熱休克處理前后的Jurkat細胞核抽提物
2、進行電泳遷移率變更分析(EMSA)檢測,發(fā)現(xiàn)在熱休克前后均出現(xiàn)特異結合帶,而且在熱休克后更明顯,提示在人Jurkat細胞核抽提物中可能存在GAGA樣元件的特異結合蛋白,并且在熱休克時結合活性增加.為篩選人Jurkat細胞中GAGA樣元件的結合蛋白,我們采用酵母單雜交體系對人Jurkat細胞MATCHMAKER cDNA文庫進行了篩選,結果出現(xiàn)63個His<'+>陽性克隆.進一步進行β-半乳糖苷酶活性分析,發(fā)現(xiàn)其中9個克隆顯示較強的β-半
3、乳糖苷酶活性.為探討GLBP1蛋白對hsp90基因的調(diào)控功能,我們首先通過對實驗條件的優(yōu)化,建立了定量檢測應激基因啟動子活性的競爭RT-PCR的體系.由于熒光素酶對熱休克非常敏感,不適用于激(熱休克)基因調(diào)控的研究.而氯霉素乙?;D移酶(CAT)是一種非常穩(wěn)定的蛋白,在60℃,10min的條件下仍保持酶活性,所以CAT基因更適用于研究熱休克基因啟動子活性.同時檢測CAT活性的經(jīng)典方法所得的結果不僅反映基因轉錄、mRNA的穩(wěn)定性,也反映了
4、翻譯及翻譯后水平的調(diào)控,所以我們建立了用RT-PCR直接檢測CAT報告基因的轉錄本(mRNA)水平的體系.分別將編碼GLBP1蛋白正義及反義cDNA真核表達質(zhì)粒分別與人hsp90α或hs90β基因上游調(diào)控序列驅動的CAT報告基因共轉染Jurkat細胞,利用競爭RT-PCR方法檢測啟動子活性.為了在體外重建染色質(zhì)結構,我們應用昆蟲表達體系表達并純化了染色質(zhì)組裝因子ACF及NAP-1蛋白;并從小牛胸腺水牛胸腺組織中純化了核心組蛋白,從而為進
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責。
- 6. 下載文件中如有侵權或不適當內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 水稻熱激蛋白Hsp90基因的克隆及互作蛋白的篩選.pdf
- IL-2Rα基因負調(diào)控元件(NRE)相關結合蛋白的篩選克隆及其功能的初探.pdf
- hsp90基因熱誘導激活通路的初探.pdf
- 大豆熱激蛋白90(Hsp90)家族基因的克隆及功能初步研究.pdf
- PKC對Jurkat細胞中hsp90基因表達調(diào)控的研究.pdf
- 真蛸熱休克蛋白90(HSP90)兩亞型基因的克隆與表達研究.pdf
- 40581.stat1的熱誘導激活及其對hsp90基因調(diào)控的機制研究
- 細胞應激適應中HSP90的作用和應激適應保護蛋白的初步篩選.pdf
- hsp90β基因在Jurkat細胞中表達調(diào)控機理的研究.pdf
- 馬鈴薯甲蟲熱激蛋白基因hsp60、hsp70和hsp90的克隆及溫度脅迫下的表達.pdf
- 熱應激對蛋鴨HSP90基因表達的影響.pdf
- HSP90α、HSP90β蛋白和mRNA在人胃癌組織中的表達及臨床意義.pdf
- hsp90蛋白的研究進展【文獻綜述】
- 58070.stat1和stat3在hsp90α基因表達調(diào)控中的作用
- 水稻HSP90基因家族功能研究.pdf
- HSP90在難愈創(chuàng)面中的作用.pdf
- HSP90與AMPK的相互作用研究.pdf
- 姜黃素靶向調(diào)控HSP90及對膠質(zhì)瘤細胞增殖和侵襲作用的研究.pdf
- Hsp90α參與IBDV感染雞法氏囊細胞及其IBDV結合區(qū)的初步研究.pdf
- 針刺抗腦缺血-再灌注神經(jīng)元凋亡的分子機制——p53和Hsp90的作用及p53對hsp90β基因的轉錄抑制.pdf
評論
0/150
提交評論