16例中國漢族兒童單純性高膽烷血癥病因探索及臨床分析.pdf

1、研究背景與目的：
　　單純性高膽烷血癥指的是在肝功能指標(biāo)上以長期血膽汁酸升高為主，而無肝酶（包括谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、γ-谷氨酰基轉(zhuǎn)移酶）顯著異常，且肝臟凝血功能和合成功能指標(biāo)均無顯著異常的生化表現(xiàn)。目前報道的以單純性高膽烷血癥為突出表現(xiàn)的疾病均是由于人類基因突變所導(dǎo)致，其中已知的與該特殊生化表現(xiàn)相關(guān)的基因包括：TJP2、BAAT、EPHX1以及SLC10A1。目前關(guān)于單純性高膽烷血癥的相關(guān)研究罕見，絕大多數(shù)關(guān)于單純性高膽烷血癥

2、的臨床表現(xiàn)及預(yù)后均未知。本文將探索16例中國漢族單純性高膽烷血癥兒童的致病病因，同時通過對患兒臨床表現(xiàn)的分析與研究，增加對兒童單純性高膽烷血癥的認(rèn)識。
　　方法：
　　本研究回顧性納入2012年1月至2016年12月在復(fù)旦大學(xué)附屬金山醫(yī)院和復(fù)旦大學(xué)附屬兒科醫(yī)院就診的中國漢族單純性高膽烷血癥兒童。本研究中單純性高膽烷血癥定義為至少3次肝功能指標(biāo)中血膽汁酸超過正常值的5倍及以上，而血膽紅素、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶，γ-谷氨?；D(zhuǎn)

3、移酶均不超出正常值上限的2倍，并且血白蛋白水平和凝血功能基本正常。排除標(biāo)準(zhǔn)為具有下列任何一項：1）合并有其他系統(tǒng)畸形，2）肝膽手術(shù)者，3)合并有病毒性肝炎、脂肪肝、肝硬化、肝動脈-門靜脈分流等肝臟疾病。
　　采用Sanger測序檢測患兒的TJP2、BAAT、EPHX1以及SLC10A1基因的外顯子，以探討我國漢族兒童單純性高膽烷血癥的病因。臨床表現(xiàn)上既往有暫時性肝內(nèi)膽汁淤積癥的患兒均進(jìn)行膽汁淤積相關(guān)的二代多基因panel測序。采用

4、Sanger測序和膽汁淤積相關(guān)的二代多基因panel測序檢測1例外周血持續(xù)總膽紅素和直接膽紅素水平略偏高患者。收集14例患者（1例外周血持續(xù)高總膽紅素和直接膽紅素患者和1例未在復(fù)旦附屬兒科醫(yī)院和復(fù)旦附屬金山醫(yī)院就診除外）最后1次在復(fù)旦大學(xué)附屬金山醫(yī)院或復(fù)旦大學(xué)附屬兒科醫(yī)院檢測的肝功能，進(jìn)行1:3病例對照研究，比較病例組和對照組之間的直接膽紅素水平的差異。
　　結(jié)果：
　　1.研究對象臨床資料
　　本研究共納入16例患兒

5、，12例男性（75％），4例女性（25%），患兒因體檢或其他疾病化驗發(fā)現(xiàn)高膽烷血癥的年齡范圍為3天至9歲9月，中位數(shù)年齡為7周，隨訪時間范圍是6周至4歲10月，中位數(shù)為1歲。除1例患兒神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育遲緩伴雙側(cè)肢體肌張力偏高，2例患兒生長發(fā)育指標(biāo)落后，7例患兒有直接膽紅素升高病史，其中1例患兒表現(xiàn)為晚發(fā)的持續(xù)略偏高的總膽紅素和直接膽紅素水平，6例患兒既往有暫時性嬰兒肝內(nèi)膽汁淤積癥外，余下患兒均未見明顯臨床表現(xiàn)異常。
　　2.單純性高膽

6、烷血癥相關(guān)基因檢測結(jié)果
　　16例患兒均檢測到SLC10A1基因少見變異或突變，其中15例為c.800C>T， p.S267F的純合突變，1例為c.776G>A,p.G259E和 c.800C>T, p.S267F的復(fù)合雜合突變。c.800C>T, p.S267F在本研究對象的檢出率是96.8%(31/32)，在千人基因組計劃數(shù)據(jù)庫(1000 Genomes Project，TGP)中提供的中國人的頻率是2.9~11.8%，差異具

7、有顯著統(tǒng)計學(xué)意義（p＜0.001）。而TJP2、BAAT、EPHX1上均未檢測到明確的致病突變。
　　3．暫時性嬰兒肝內(nèi)膽汁淤積癥患者的二代多基因panel測序結(jié)果
　　6例伴有暫時性嬰兒肝內(nèi)膽汁淤積癥患者共檢測到17個外顯子區(qū)單核苷酸替換和2個內(nèi)含子區(qū)單核苷酸替換。然而，僅1例檢測到可能致病的CYP7B1基因上c.776G>T, P.G259V（來自母親）和c.334C>T, p. R112X（來自父親）的復(fù)合雜合突變，余

8、下5例患者均未檢測到明確的致病突變。
　　4.外周血總膽紅素和直接膽紅素略偏高患者的二代多基因panel和SLCO1B1/SLCO1B3測序結(jié)果
　　外周血總膽紅素和直接膽紅素略偏高的1例兒童的二代多基因panel測序未檢測到明確致病突變。SLCO1B1/SLCO1B3基因也未檢測到致病突變。
　　5.病例組與對照組直接膽紅素比較結(jié)果
　　病例組外周血直接膽紅素水平為3.2±1.7μmol/L，對照組的直接膽紅素

9、水平為1.6±0.7μmol/L，兩組比較有顯著統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.0003）。單因素條件Logistic回歸分析顯示病例組直接膽紅素水平是對照組的1.89倍（95%CI：1.228-2.909），差異具有統(tǒng)計學(xué)差異（P=0.004）。
　　結(jié)論：
　　1.SLC10A1基因變異導(dǎo)致的Na+-?；撬峁餐D(zhuǎn)運體多肽（Sodium taurocholate cotransporting polypeptide，NTCP）缺陷是我