穿心蓮內(nèi)酯對(duì)大鼠肝微粒體CYP450酶活性的體內(nèi)外影響研究.pdf

1、目的：⑴分別建立檢測(cè)大鼠肝微粒體中甲苯磺丁脲、奧美拉唑、非那西丁、咪達(dá)唑侖和美托洛爾原型及代謝產(chǎn)物的高效液相色譜方法，評(píng)價(jià)大鼠肝微粒體中CYP2C9、CYP2C19、CYP1A2、CYP3A4和CYP2D6酶的活性，研究穿心蓮內(nèi)酯對(duì)肝微粒體中CYP450五個(gè)亞型酶活性的體外影響。⑵建立同時(shí)檢測(cè)大鼠血漿中甲苯磺丁脲、奧美拉唑、非那西丁、咪達(dá)唑侖和美托洛爾的超高效液相色譜-質(zhì)譜（UPLC- MS）的方法，研究穿心蓮內(nèi)酯對(duì)5種探針?biāo)幵诖笫篌w內(nèi)

2、的藥代動(dòng)力學(xué)的影響，為臨床合理用藥提供理論依據(jù)。
　　方法：①以甲苯磺丁脲、奧美拉唑、非那西丁、咪達(dá)唑侖和美托洛爾這5個(gè)藥作為底物，采用Agilent ZORBAX SB-C18色譜柱分離，色譜流動(dòng)相均采用乙腈-水-0.1％三氟乙酸體系。采用差速離心法制備肝微粒體并且測(cè)定肝微粒體濃度。大鼠肝微粒體分別加入以上五個(gè)底物，在37 oC條件下孵育一定時(shí)間后，終止反應(yīng)，經(jīng)有機(jī)相提取后，用建立的 HPLC方法測(cè)定底物及其代謝物的濃度，根據(jù)米

3、氏方程分別計(jì)算五個(gè)底物的 Km值。然后分別以五個(gè)底物 Km值附近濃度作為底物濃度，分別將不同濃度的穿心蓮內(nèi)酯加入到上述體系中，以計(jì)算半數(shù)最大抑制濃度（IC50）。②雄性SD大鼠12只，將其隨機(jī)分成2組（對(duì)照組和穿心蓮內(nèi)酯組），每組為6只。其中對(duì)照組給予生理鹽水灌胃，劑量為5ml/kg，1天給藥1次，連續(xù)給藥七天；穿心蓮內(nèi)酯組給予穿心蓮內(nèi)酯灌胃，劑量為10mg/kg，1天給藥1次，連續(xù)給藥七天。第七天最后一次給藥30min后，2組動(dòng)物同時(shí)

4、灌胃給予甲苯磺丁脲1mg/kg、奧美拉唑10mg/kg、非那西丁5mg/kg、咪達(dá)唑侖10mg/kg以及美托洛爾20mg/kg；在給予5個(gè)探針?biāo)幒蟛煌瑫r(shí)間點(diǎn)尾靜脈分別進(jìn)行采血0.3ml，分離血漿。用建立的UPLC- MS方法同時(shí)測(cè)定血漿中5個(gè)探針?biāo)幍臐舛?；用DAS3.0程序分別計(jì)算5個(gè)探針?biāo)幍闹饕幋鷦?dòng)力學(xué)參數(shù)（Cmax, CLz/F, Tmax, t1/2, AUC(0-t), AUC(0-∞)），用SPSS17.0軟件比較2組主要藥

5、代動(dòng)力學(xué)參數(shù)的差異。
　　結(jié)果：⑴100μM的穿心蓮內(nèi)酯可以明顯抑制大鼠肝微粒體CYP450五個(gè)亞型酶的活性，穿心蓮內(nèi)酯對(duì)大鼠肝微粒體中5個(gè)底物的半數(shù)最大抑制濃度（IC50）分別是2.654μM、1.113μM、9.608μM、16.40μM和20.67μM。⑵穿心蓮內(nèi)酯可以增加甲苯磺丁脲、奧美拉唑、非那西丁、咪達(dá)唑侖和美托洛爾的血藥濃度以及生物利用度。與對(duì)照組相比，穿心蓮內(nèi)酯組可使甲苯磺丁脲的清除率下降、峰濃度增加以及生物利用度

6、升高，而半衰期和達(dá)峰時(shí)間則無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；穿心蓮內(nèi)酯使奧美拉唑、非那西丁和美托洛爾峰濃度和生物利用度升高，而半衰期、清除率和達(dá)峰時(shí)間則無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；穿心蓮內(nèi)酯對(duì)咪達(dá)唑侖的主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　結(jié)論：①建立的HPLC分別檢測(cè)大鼠肝微粒體中甲苯磺丁脲、奧美拉唑、非那西丁、咪達(dá)唑侖和美托洛爾及其的代謝物方法，專屬性高，分離完全，檢測(cè)時(shí)間快，適合CYP450酶五個(gè)亞型酶藥代動(dòng)力學(xué)研究。②建立的同時(shí)檢測(cè)大鼠血漿中甲苯磺丁脲、奧美