金絲桃苷對大鼠腦缺血再灌注損傷的保護作用及其BK通道作用機制.pdf

1、目的：
　　探討線栓法制備小鼠局灶性腦缺血再灌注模型成功的兩種評價方法間的相關性，為評價該模型提供一種新的方法和標準。觀察金絲桃苷(Hyp)對大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷的保護作用，以及 BK通道在Hyp抗腦缺血再灌注損傷中的作用，探討Hyp抗缺血性腦損傷作用的機制。
　　方法：
　　1.20只雄性KM小鼠，隨即分為模型組(n=10)、假手術組(n=10)，采用線栓法阻塞大腦中動脈建立局灶性腦缺血再灌注模型，分別于術前、

2、缺血即刻、缺血2 h、再灌注即刻、再灌注24 h利用激光散斑成像技術監(jiān)測各組小鼠腦血流量變化，再灌注24 h后進行神經功能評分，并行TTC染色法檢測腦梗死體積百分比，相關性分析判斷腦血流量變化與梗死體積百分比之間的相關性。
　　2.使用線栓法制備大鼠右側大腦中動脈阻塞致局灶性腦缺血再灌注模型。雄性 SD大鼠隨機分為：假手術組組、模型組、Hyp(12.5,25,50mg/Kg)組和陽性藥銀杏葉提取物組。術前灌胃給藥3天。激光散斑成像

3、技術分別于術前、術后即刻、缺血2h、再灌注即刻、再灌注24h監(jiān)測腦血流變化；缺血2h再灌注24h后，觀察神經功能損傷，TTC染色法檢測腦梗死體積；
　　3.檢測血清中SOD、MDA含量；
　　4. RT-PCR檢測神經元中BK-α、BK-β4、PKC-αmRNA表達水平；
　　5. Western blot檢測神經元中BK-α、BK-β4、PKC-α和腦血管平滑肌中BK-β1亞基蛋白表達情況；
　　結果：

4、　　1.與假手術組相比，模型組小鼠出現(xiàn)明顯的神經功能異常，TTC染色顯示出明顯的腦梗死，梗死側腦血流量明顯降低，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。缺血即刻、缺血2 h小鼠腦血流量變化與再灌注24 h腦梗死體積的相關系數(shù)R2值分別為0.55、0.28(P<0.05)。
　　2.與假手術組相比，模型組大鼠神經功能評分值明顯升高(P<0.01)；與模型組相比，Hyp低、中、高劑量組、GBE組均可降低其神經功能評分（P<0.05,P<0.

5、01）。與假手術組比較,模型組大鼠局部腦血流顯著下降,有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，再灌注即刻、再灌注24h，Hyp各劑量組大鼠局部腦血流均有不同程度升高,其中，再灌注24h，Hyp中、高劑量組血流值恢復最高(P<0.05,P<0.01)。與假手術組相比，模型組大鼠可見明顯的梗死(P<0.01)；與模型組相比，金絲桃苷低、中、高劑量組、GBE組均可降低腦梗死體積(P<0.05,P<0.01)。
　　3.與假手術組相比，模型組大鼠血

6、清MDA值明顯升高、SOD值明顯降低(P<0.05,P<0.01)。金絲桃苷低、中、高劑量組及GBE組均顯著降低血清中MDA含量，升高SOD含量，與模型組相比，差異有顯著性(P<0.05,P<0.01)。
　　4. RT-PCR結果顯示，與假手術組比較，模型組大鼠腦組織中神經元BK-α、PKC-α基因表達顯著下降(P<0.05)，BK-β4基因表達顯著升高(P<0.01)。與模型組相比，Hyp低、中、高劑量組可顯著增加BK-α表達

7、(P<0.01)，Hyp低、中、高劑量組、GBE組可明顯降低BK-β4基因表達(P<0.01)，Hyp低、中、高劑量組、GBE組可顯著增加PKC-α基因表達(P<0.01)。
　　5. Western blot結果顯示，與假手術組比較，模型組大鼠神經元中 BK-α、PKC-α表達顯著下降(P<0.05)，BK-β4表達顯著升高(P<0.01)。與模型組相比，Hyp中、高劑量組可顯著增加BK-α表達(P<0.01)，Hyp低、中、高

8、劑量組、GBE組可明顯降低 BK-α4表達(P<0.01)，顯著增加 PKC-?蛋白表達(P<0.01)。與假手術組相比，模型組大鼠腦血管平滑肌中BK-β1表達顯著下降(P<0.01)。與模型組相比，Hyp中、高劑量組可顯著增加BK-α1蛋白表達(P<0.05,P<0.01)。
　　結論：
　　1.缺血即刻的皮層血流變化與梗死體積具有較好的線性相關。小鼠腦血流量變化是除神經功能評分和腦梗死體積以外另一種可判斷小鼠局灶性腦缺血