大豆異黃酮對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制探討.pdf

1、目的：1.觀察大豆異黃酮(SI)對(duì)大鼠全腦缺血再灌注損傷后腦組織bcl-2、Bax的表達(dá)及NO、NOS的影響。2.探討SI對(duì)腦缺血再灌注損傷后腦細(xì)胞的神經(jīng)保護(hù)機(jī)制。
　　方法：成年Sprague-Dawley大鼠50只，隨機(jī)分為5組：假手術(shù)組，缺血再灌組，大豆異黃酮預(yù)處理低、中、高劑量組，每組10只。大豆異黃酮預(yù)處理各組連續(xù)21d分別按60mg/kg、120mg/kg、240mg/kg灌胃，余下兩組等體積的生理鹽水灌胃。滿21d后

2、，假手術(shù)組僅行手術(shù)，不予缺血；余四組均以三血管(雙側(cè)頸總動(dòng)脈及基底動(dòng)脈)阻斷法建立全腦缺血再灌注損傷模型，以腦電圖變?yōu)槠街弊鳛槿X缺血鑒定標(biāo)志。缺血1h后進(jìn)行再灌1h。動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)腦電圖變化，光鏡下觀察腦組織病理形態(tài)學(xué)變化,生化檢測(cè)腦組織SOD活性、MDA含量、NO含量、T-NOS及iNOS活性，免疫組織化學(xué)法定性檢測(cè)腦組織bcl-2、Bax免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞平均計(jì)數(shù)，半定量RT-PCR法檢測(cè)大腦皮層bcl-2 mRNA、Bax mRNA表達(dá)

3、情況。
　　結(jié)果：1、病理學(xué)改變：假手術(shù)組腦組織神經(jīng)細(xì)胞數(shù)目基本正常，形態(tài)正常，胞體飽滿，胞漿淡染，核仁明顯。缺血再灌注組腦組織損傷嚴(yán)重，腦組織正常結(jié)構(gòu)消失，形態(tài)學(xué)改變明顯，神經(jīng)細(xì)胞及膠質(zhì)細(xì)胞均腫脹，變性壞死，胞膜不清，胞核固縮，間質(zhì)水腫明顯，細(xì)胞及血管周圍間隙增大。而大豆異黃酮各組病變輕微，多數(shù)細(xì)胞保存完好，神經(jīng)細(xì)胞及間質(zhì)細(xì)胞僅有輕微水腫，胞膜完整，核仁清晰可見。
　　2、生化檢測(cè)結(jié)果顯示：再灌組與假手術(shù)組相比，SOD活性

4、明顯降低(P<0.05)， MDA含量、T-NOS活性、iNOS活性、NO含量均顯著升高(P<0.05)。用不同劑量的大豆異黃酮干預(yù)后，SOD活性較再灌組均明顯升高(P<0.05)，但低于假手術(shù)組(P<0.05)；MDA含量、T-NOS活性、iNOS活性、NO含量較再灌組均明顯降低(P<0.05)，但高于假手術(shù)組(P<0.05)。各用藥組之間，中劑量組較其他兩組相比差異顯著(P<0.05)。
　　3、免疫組化檢測(cè)結(jié)果顯示：假手術(shù)組

5、僅見微量的bcl-2和Bax陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)。再灌組與假手術(shù)組相比，bcl-2表達(dá)有所升高(P<0.05)，Bax表達(dá)顯著增強(qiáng)(P<0.05)， bcl-2/Bax比值有所降低。SI各組與再灌組相比，除低劑量組外，bcl-2陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目明顯增多(P<0.05)，而Bax陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目均顯著降低(P<0.05)，bcl-2/Bax比值有所升高；SI各組間中劑量組 bcl-2表達(dá)升高最明顯，Bax表達(dá)降低也最明顯， bcl-2/Bax比值升高的最

6、顯著(P<0.05)。
　　4、半定量RT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示：正常腦組織bcl-2 mRNA未見明顯表達(dá)，Bax m RNA有低水平的表達(dá)。再灌組bcl-2 mRNA表達(dá)有所增多(P<0.05), Bax mRNA表達(dá)顯著增加(P<0.05)，bcl-2/Bax比值顯著性降低(P<0.05)。大豆異黃酮各組bcl-2 mRNA表達(dá)均明顯高于缺血再灌組(P<0.05)；Bax mRNA表達(dá)較再灌組相比明顯降低(P<0.05)，但高

7、于假手術(shù)組(P<0.05)；bcl-2/Bax比值顯著高于再灌注組(P<0.05)。三個(gè)劑量組之間bcl-2 mRNA和Bax mRNA表達(dá)，中劑量與低劑量組相比差異顯著(P<0.05)，而高劑量組與另外兩組相比差異不顯著(P>0.05)；但bcl-2/Bax比值三組之間均有差異(P<0.05)。
　　結(jié)論：1、腦缺血再灌注損傷時(shí)氧自由基產(chǎn)生增加，NO的生成增多以及上調(diào)促凋亡基因Bax和下調(diào)抑凋亡基因bcl-2，降低bcl-2/B

8、ax比值。
　　2、SI對(duì)腦缺血再灌注損傷后腦細(xì)胞具有明顯的神經(jīng)保護(hù)作用，減輕缺血再灌注損傷。
　　3、SI對(duì)神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)的機(jī)理有：
　　1)增加腦組織SOD活性，降低MDA含量，減少自由基的生成，增加自由基的清除，降低體內(nèi)自由基含量，抑制膜脂質(zhì)過(guò)氧化，減輕細(xì)胞膜損傷，發(fā)揮抗氧化作用。
　　2)降低NOS活力，減少NO生成，減輕神經(jīng)毒性作用。
　　3)上調(diào)bcl-2，下調(diào)Bax的表達(dá)，增加bcl-2/Bax