Cox-2、Bcl-2、Fas蛋白在膽道不全梗阻大鼠膽總管上皮細(xì)胞中的表達(dá)及意義.pdf

1、背景與目的
　　膽道不全梗阻在膽道疾病中比較常見，它是由很多種病因引起的，比如膽管周圍組織炎癥、膽管內(nèi)結(jié)石、腫瘤、胰腺病變、寄生蟲、先天性膽道疾病等。從而引起梗阻性黃疸，導(dǎo)致體內(nèi)水電解質(zhì)酸堿平衡紊亂、內(nèi)毒素血癥、高膽紅素血癥，甚至引起肝腎功能損害以及凝血機(jī)制異常。良性膽道梗阻引起的長(zhǎng)期膽汁淤積以及長(zhǎng)期慢性狹窄性膽管炎最終都可以導(dǎo)致膽管癌的發(fā)生。目前，良性膽道梗阻引起膽管癌的分子生物學(xué)機(jī)制還不明確，但是在消化道惡性腫瘤，比如胃癌、結(jié)

2、直腸癌、食管癌，特別是膽管癌中Cox-2、Bcl-2蛋白的表達(dá)異常升高，而且Cox-2、Bcl-2蛋白的表達(dá)與腫瘤的發(fā)生發(fā)展有密切的關(guān)系。因此對(duì)這些蛋白在良性膽道梗阻中的表達(dá)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究就顯得很有必要。在這項(xiàng)研究中，應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)膽總管不完全梗阻大鼠的Cox-2和Bcl-2、Fas蛋白在膽總管上皮細(xì)胞中不同時(shí)間的表達(dá)水平，觀察Cox-2和膽總管上皮細(xì)胞組織學(xué)變化的關(guān)系，在膽總管不完全梗阻時(shí)，其上皮細(xì)胞凋亡的調(diào)節(jié)機(jī)制。從而說(shuō)明C

3、ox-2、Bcl-2是否有致膽道不全梗阻大鼠膽總管上皮細(xì)胞發(fā)生癌變的可能。
　　方法
　　選取60只健康清潔級(jí)Wistar大鼠，不區(qū)分雌雄，按照隨機(jī)對(duì)照原則分為兩組:A組40只，為膽總管不完全梗阻組，再分為4個(gè)亞組，每亞組10只;B組20只，為實(shí)驗(yàn)對(duì)照組，再分為4個(gè)亞組，每亞組5只。A組的大鼠在全麻后行膽總管不完全結(jié)扎，建立動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?B組的大鼠在全麻后僅僅游離膽總管，不做結(jié)扎。各組大鼠分別于術(shù)后3天、7天、14天、21天

4、采取門靜脈血并且切取近端膽總管標(biāo)本，檢測(cè)血清總膽紅素(TBIL)數(shù)值的變化，HE染色法觀察膽總管組織形態(tài)學(xué)的改變，TUNEL法觀察膽總管上皮細(xì)胞凋亡水平，免疫組化法(SABC法)檢測(cè)大鼠膽總管上皮細(xì)胞中Cox-2、Bcl-2、Fas蛋白的表達(dá)水平。數(shù)據(jù)結(jié)果采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行分析，計(jì)量資料采用均數(shù)加減標(biāo)準(zhǔn)差（(x)±s）表示，兩組結(jié)果之間的比較采用t檢驗(yàn)，多組之間的比較采用方差分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

5、　　結(jié)果
　　1.總膽紅素(TBIL)數(shù)值測(cè)定:實(shí)驗(yàn)組（A組）隨著膽總管不全梗阻的時(shí)間延長(zhǎng)，血清膽紅素?cái)?shù)值呈逐漸增高趨勢(shì)，而對(duì)照組（B組）數(shù)值變化不顯著。實(shí)驗(yàn)組（A組）與對(duì)照組（B組）的比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　2.膽總管上皮細(xì)胞組織形態(tài)變化:實(shí)驗(yàn)組（A組）膽總管于不完全結(jié)扎后7天稍擴(kuò)張，而且發(fā)現(xiàn)有較多的炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，術(shù)后21天發(fā)現(xiàn)膽總管擴(kuò)張更加明顯，而且膽管壁明顯增厚，出現(xiàn)纖維組織和上皮組織增生，對(duì)照組（B組

6、）無(wú)明顯變化。
　　3.細(xì)胞凋亡水平變化:實(shí)驗(yàn)組（A組）于術(shù)后3天即發(fā)現(xiàn)膽總管上皮細(xì)胞凋亡增加，而且隨著膽總管不全梗阻的時(shí)間延長(zhǎng)，細(xì)胞凋亡數(shù)值呈明顯增高趨勢(shì);對(duì)照組（B組）膽總管上皮組織中偶見凋亡細(xì)胞。A組與B組細(xì)胞凋亡數(shù)相比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。
　　4.Cox-2、Bcl-2、Fas蛋白的表達(dá)結(jié)果:Cox-2蛋白在實(shí)驗(yàn)組（A組）中的表達(dá)于術(shù)后3天和7天呈現(xiàn)弱陽(yáng)性，14天、21天均呈現(xiàn)陽(yáng)性表達(dá);Cox-2蛋白在對(duì)

7、照組（B組）中均為陰性表達(dá)。Bcl-2蛋白在實(shí)驗(yàn)組（A組）中隨著膽總管不全結(jié)扎的時(shí)間延長(zhǎng)，其表達(dá)逐漸增強(qiáng)，術(shù)后3天為弱陽(yáng)性表達(dá)，術(shù)后7天、14天均呈現(xiàn)陽(yáng)性表達(dá)，術(shù)后21天呈現(xiàn)強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá);而在對(duì)照組（B組）膽總管上皮細(xì)胞中Bcl-2的表達(dá)均為陰性。Fas蛋白在實(shí)驗(yàn)組（A組）中的表達(dá)也隨著膽總管不全結(jié)扎的時(shí)間延長(zhǎng)而逐漸增強(qiáng)，術(shù)后3天為弱陽(yáng)性表達(dá)，術(shù)后7天、14天均呈現(xiàn)陽(yáng)性表達(dá)，術(shù)后21天呈現(xiàn)強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá);而在對(duì)照組（B組）膽總管上皮細(xì)胞中幾乎