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文檔簡介
1、目的與意義:慢性蕁麻疹和慢性濕疹是多因素引起的變態(tài)反應(yīng)性疾病,具有病因復(fù)雜、反復(fù)發(fā)作、難以預(yù)防的特征。中醫(yī)認(rèn)為,雖然二者表現(xiàn)為表皮腠理之患,但與臟腑氣血息息相關(guān)。主要是由機(jī)體稟賦不受,脾失健運(yùn),導(dǎo)致濕熱內(nèi)蘊(yùn),此時(shí)外感風(fēng)邪就會出現(xiàn)風(fēng)濕熱邪相搏,浸淫皮膚,從而表現(xiàn)出一系列濕熱型慢性蕁麻疹和慢性濕疹的癥狀:例如風(fēng)團(tuán)皮損色紅、水皰糜爛、劇烈瘙癢等等。祛風(fēng)止癢顆粒是我校中醫(yī)皮膚科專家的臨床常用驗(yàn)方開發(fā)的中藥復(fù)方新制劑,由近十味中藥組成,臨床主要用
2、于風(fēng)熱型慢性蕁麻疹、濕毒郁結(jié)肌膚癥、皮膚瘙癢癥、濕熱型慢性濕疹等皮膚病。本課題依據(jù)中藥新藥臨床前藥效學(xué)評價(jià)的技術(shù)要求,研究了祛風(fēng)止癢顆粒功能主治相關(guān)的主要藥理作用,并且討論了可能存在的作用機(jī)制,以期為該制劑的臨床研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
方法:
1.試驗(yàn)藥物
祛風(fēng)止癢顆粒,由東方藥林藥業(yè)有限公司提供;皮敏消膠囊,沈陽澳華制藥有限公司;撲爾敏,廣州康和藥業(yè)有限公司;醋酸地塞米松,浙江仙琚制藥股份有限公司
3、。
2.動物
昆明種小鼠,SPF級,18-22g,雌雄各半;SD大鼠,SPF級,160-200g,雌雄各半;90-100g,雄性;豚鼠,清潔級,200-300g,雌雄各半;由南方醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供,合格證號:SCXK粵2006-0015。
3.觀察指標(biāo):
3.1 祛風(fēng)止癢顆粒抗變態(tài)反應(yīng)的實(shí)驗(yàn)研究
3.1.1 祛風(fēng)止癢顆粒對大鼠同種被動皮膚過敏實(shí)驗(yàn)的影響
4、 3.1.2 祛風(fēng)止癢顆粒對大鼠顱骨骨膜肥大細(xì)胞脫顆粒的影響
3.2 祛風(fēng)止癢顆粒對非免疫性接觸性蕁麻疹的影響
3.2.1 祛風(fēng)止癢顆粒對二甲基亞砜致豚鼠耳腫脹的影響
3.2.2 祛風(fēng)止癢顆粒對桂皮酸致豚鼠耳腫脹的影響
3.3 祛風(fēng)止癢顆粒對外源性藥物致動物皮膚瘙癢的影響
3.3.1 祛風(fēng)止癢顆粒對右旋糖酐致小鼠皮膚瘙癢的影響
3.3.2 祛風(fēng)止癢顆
5、粒對組織胺致豚鼠皮膚瘙癢的影響
3.3.3 祛風(fēng)止癢顆粒對4-氨基吡啶致小鼠皮膚瘙癢的影響
3.4 祛風(fēng)止癢顆粒抗炎作用研究
3.4.1 祛風(fēng)止癢顆粒對大鼠毛細(xì)血管通透性的影響
3.4.2 祛風(fēng)止癢顆粒對二甲苯致小鼠耳腫脹的影響
3.5 祛風(fēng)止癢顆??耿裥妥儜B(tài)反應(yīng)機(jī)制探討
3.5.1 祛風(fēng)止癢顆粒對Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)大鼠血清中IFN-γ含量的影響
6、 3.5.2 祛風(fēng)止癢顆粒對Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)大鼠血清中IL-4含量的影響
3.5.3 祛風(fēng)止癢顆粒對Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)大鼠血清中IgE含量的影響
4.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析:
采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差((X)±s)表示。結(jié)果比較運(yùn)用重復(fù)測量方差分析,單因素方差分析(One-way ANOVA),組間多重比較方差齊時(shí)采用LSD法,不齊時(shí)用Dunnett's T3。以P≤0.05為差異有統(tǒng)計(jì)
7、學(xué)意義。
結(jié)果:
1.祛風(fēng)止癢顆??棺儜B(tài)反應(yīng)的實(shí)驗(yàn)研究
1.1 祛風(fēng)止癢顆粒對大鼠同種被動皮膚過敏實(shí)驗(yàn)的影響各組大鼠1:1抗血清注射點(diǎn)皮膚吸光度值經(jīng)One-way ANOVA分析組間有顯著性差異(F=3.776,P=0.005),需進(jìn)一步兩兩比較;1:2抗血清注射點(diǎn)皮膚吸光度值經(jīng)One-way ANOVA分析組間沒有顯著性差異(F=1.922,P=0.106)。結(jié)果:1:1抗血清注射點(diǎn),撲爾敏組
8、與模型組比較有顯著性差異(P<0.01),皮敏消膠囊組、祛風(fēng)止癢顆粒高、中、低劑量組與模型組比較也有顯著性差異(P<0.05),各給藥組均可降低抗血清引起的大鼠背部皮膚藍(lán)斑的吸光度值。
1.2 祛風(fēng)止癢顆粒對大鼠顱骨骨膜肥大細(xì)胞脫顆粒的影響各組大鼠顱骨骨膜肥大細(xì)胞脫顆粒率經(jīng)One-way ANOVA分析組間有顯著性差異(F=154.57,P=0.000),需進(jìn)一步兩兩比較。結(jié)果:模型組與空白組比較有顯著性差異,顱骨骨膜肥大
9、細(xì)胞脫顆粒率顯著增加,造模成功;撲爾敏組、皮敏消膠囊組、祛風(fēng)止癢顆粒高、中劑量組與模型組比較有顯著性差異(P<0.01),祛風(fēng)止癢顆粒低劑量組也有顯著性差異(P<0.05),各給藥組均可使抗血清所致的大鼠顱骨骨膜肥大細(xì)胞脫顆粒率降低。
2.祛風(fēng)止癢顆粒對非免疫性接觸性蕁麻疹的影響
2.1 祛風(fēng)止癢顆粒對二甲基亞砜致豚鼠耳腫脹的影響各組豚鼠在各時(shí)間點(diǎn)耳廓腫脹程度采用重復(fù)測量和單因素方差分析,時(shí)間點(diǎn)和組別之間沒有
10、交互效應(yīng)(F=0.762,P=0.716);組別之間有主效應(yīng)(F=3.548,P=0.008);各時(shí)間點(diǎn)之間有主效應(yīng)(F=121.580,P=0.000),需進(jìn)行兩兩比較。結(jié)果表明,除45min點(diǎn)祛風(fēng)止癢顆粒低劑量組,120min、180min點(diǎn)祛風(fēng)止癢顆粒中、低劑量組外,與模型組比較,其余各給藥組均可減輕二甲基亞砜所致豚鼠耳腫脹(P<0.05)。
2.2 祛風(fēng)止癢顆粒對桂皮酸致豚鼠耳腫脹的影響各組豚鼠在各時(shí)間點(diǎn)耳廓腫脹程
11、度采用重復(fù)測量和單因素方差分析,時(shí)間點(diǎn)和組別之間有交互效應(yīng)(F=3.746,P=0.000):組別之間有主效應(yīng)(F=8.773,P=0.000);各時(shí)間點(diǎn)之間有主效應(yīng)(F=497.646,P=0.000),需進(jìn)行兩兩比較。結(jié)果表明,除15min,30min時(shí)間點(diǎn)各給藥組,120min點(diǎn)的祛風(fēng)止癢顆粒低劑量組,180min的祛風(fēng)止癢顆粒中、低劑量組外,其余各給藥組均具有顯著性差異(P<0.05),使桂皮酸致豚鼠耳腫脹度降低。
12、 3.祛風(fēng)止癢顆粒對外源性藥物致動物皮膚瘙癢的影響
3.1 祛風(fēng)止癢顆粒對右旋糖酐致小鼠皮膚瘙癢的影響各組小鼠30min內(nèi)皮膚搔癢次數(shù)經(jīng)One-way ANOVA分析組間有顯著性差異(F=5.662,P=0.000);30min內(nèi)皮膚搔癢持續(xù)時(shí)間經(jīng)One-way ANOVA分析組間也有顯著性差異(F=2.603,P=0.024),均需進(jìn)一步兩兩比較(采用LSD法)。結(jié)果:模型組與空白組比較,30min內(nèi)皮膚搔癢次數(shù)明顯增加
13、(P<0.01),搔癢持續(xù)時(shí)間明顯延長(P<0.01);撲爾敏、皮敏消膠囊和祛風(fēng)止癢顆粒高、中劑量組與模型組比較有顯著性差異(P<0.01),祛風(fēng)止癢顆粒低劑量組與模型組比較有顯著性差異(P<0.05),使右旋糖酐所致小鼠搔癢次數(shù)減少,持續(xù)時(shí)間縮短。
3.2 祛風(fēng)止癢顆粒對磷酸組胺致豚鼠皮膚瘙癢的影響各組豚鼠需涂抹組胺次數(shù)經(jīng)One-way ANOVA分析組間有顯著性差異(F=8.073,P=0.000);涂抹組胺用量經(jīng)On
14、e-way ANOVA分析組間也有顯著性差異(F/Welch=12.935,P=0.000);均需進(jìn)一步兩兩比較。結(jié)果:祛風(fēng)止癢顆粒高、中、低劑量組與模型組比較(P<0.05),撲爾敏組與模型組比較(P<0.01),涂抹組胺用量增加;除皮敏消膠囊組外,撲爾敏組、祛風(fēng)止癢顆粒高、中、低劑量組與模型組比較,涂抹組胺次數(shù)增加(P<0.01)。
3.3 祛風(fēng)止癢顆粒對4-氨基吡啶致小鼠皮膚瘙癢的影響各組小鼠涂抹4-氨基吡啶后10m
15、in內(nèi)皮膚搔癢次數(shù)經(jīng)One-way ANOVA分析組間有顯著性差異(F=3.905,P=0.004),皮膚搔癢持續(xù)時(shí)間經(jīng)One-way ANOVA分析組間也有顯著性差異(F=9.631,P=0.000);均需進(jìn)一步兩兩比較。結(jié)果:撲爾敏組、皮敏消膠囊組、祛風(fēng)止癢顆粒高、中、低劑量組與模型組比較皮膚搔癢次數(shù)減少,有顯著性差異(P<0.01);撲爾敏組、皮敏消膠囊組、祛風(fēng)止癢顆粒高、中劑量組與模型組比較皮膚搔癢持續(xù)時(shí)間縮短,也有顯著性差異(
16、P<0.01)。
4.祛風(fēng)止癢顆??寡鬃饔玫膶?shí)驗(yàn)研究
4.1 祛風(fēng)止癢顆粒對大鼠毛細(xì)血管通透性的影響各組大鼠皮膚吸光度值經(jīng)One-way ANOVA分析組間有顯著性差異(F=11.390,P=0.000),需進(jìn)一步兩兩比較。結(jié)果:撲爾敏組、皮敏消膠囊組、祛風(fēng)止癢顆粒高、中、低劑量組與模型組比較有顯著性差異,吸光度值降低(P<0.01)。
4.2 祛風(fēng)止癢顆粒對二甲苯致小鼠耳腫脹的影響各組小鼠耳腫
17、脹度經(jīng)One-way ANOVA分析組間有顯著性差異(F=4.873,P=0.001),需進(jìn)一步兩兩比較。結(jié)果:醋酸地塞米松組、皮敏消膠囊組、祛風(fēng)止癢顆粒高劑量組與模型組比較有顯著性差異,可減輕二甲苯所致小鼠耳腫脹程度(P<0.05)。
5.祛風(fēng)止癢顆??耿裥妥儜B(tài)反應(yīng)的機(jī)制探討
5.1 祛風(fēng)止癢顆粒對Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)大鼠血清中IFN-γ、IL-4含量的影響各組大鼠血清中IFN-γ,含量經(jīng)One—way ANOVA
18、分析組間有顯著性差異(F=3.111,P=0.010),需進(jìn)一步兩兩比較。結(jié)果:模型組與空白組比較,有顯著性差異(P<0.01),IFN-γ含量減少:撲爾敏組、皮敏消膠囊組、祛風(fēng)止癢顆粒高、中、低劑量組與模型組比較也有顯著性差異(P<0.05),各給藥組均可使Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)大鼠血清中IFN-γ含量增加。
各組大鼠血清中IL-4含量經(jīng)One-way ANOVA分析組間有顯著性差異(F=3.468,P=0.005),需進(jìn)一步兩兩
19、比較。結(jié)果:模型組與空白組比較,有顯著性差異(P<0.01),IL-4含量增加;撲爾敏組、皮敏消膠囊組、祛風(fēng)止癢顆粒高、中劑量組與模型組比較也有顯著性差異(P<0.05),降低Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)大鼠血清中IL-4含量。
大鼠血清中的IFN-γ/IL-4含量經(jīng)One-way ANOVA分析組間有顯著性差異(F=6.118,P=0.000),需進(jìn)一步兩兩比較。結(jié)果:模型組與空白組比較,有顯著性差異(P<0.01),比值減??;撲爾敏組
20、、皮敏消膠囊組、祛風(fēng)止癢顆粒高、中劑量組與模型組比較有顯著性差異(P<0.01),比值增加。
5.2 祛風(fēng)止癢顆粒對Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)大鼠血清中IgE含量的影響各組大鼠血清中IgE含量經(jīng)One-way ANOVA分析組間有顯著性差異(F=11.343,P=0.000),需進(jìn)一步兩兩比較。結(jié)果:模型組與空白組比較,有顯著性差異(P<0.01),IgE含量增加;撲爾敏組、皮敏消膠囊組、祛風(fēng)止癢顆粒高、中、低劑量組與模型組比較也有顯著
21、性差異(P<0.01),IgE含量減少。
實(shí)驗(yàn)結(jié)論:
1.祛風(fēng)止癢顆粒具有抗過敏作用:能夠抑制大鼠同種被動皮膚過敏反應(yīng),抑制大鼠顱骨骨膜肥大細(xì)胞脫顆粒,可對抗非免疫性接觸性蕁麻疹。
2.祛風(fēng)止癢顆粒具有止癢作用:可抑制右旋糖酐和4-氨基吡啶致小鼠皮膚瘙癢,增加豚鼠耐受磷酸組胺量。
3.祛風(fēng)止癢顆粒具有抗炎作用:能抑制磷酸組胺所致的大鼠毛細(xì)血管通透性增加以及二甲苯所致的小鼠耳腫脹。<
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