祛風(fēng)止癢顆粒藥效學(xué)及相關(guān)機(jī)制研究.pdf

1、目的與意義:慢性蕁麻疹和慢性濕疹是多因素引起的變態(tài)反應(yīng)性疾病,具有病因復(fù)雜、反復(fù)發(fā)作、難以預(yù)防的特征。中醫(yī)認(rèn)為,雖然二者表現(xiàn)為表皮腠理之患,但與臟腑氣血息息相關(guān)。主要是由機(jī)體稟賦不受,脾失健運(yùn),導(dǎo)致濕熱內(nèi)蘊(yùn),此時(shí)外感風(fēng)邪就會(huì)出現(xiàn)風(fēng)濕熱邪相搏,浸淫皮膚,從而表現(xiàn)出一系列濕熱型慢性蕁麻疹和慢性濕疹的癥狀:例如風(fēng)團(tuán)皮損色紅、水皰糜爛、劇烈瘙癢等等。祛風(fēng)止癢顆粒是我校中醫(yī)皮膚科專家的臨床常用驗(yàn)方開發(fā)的中藥復(fù)方新制劑,由近十味中藥組成,臨床主要用

2、于風(fēng)熱型慢性蕁麻疹、濕毒郁結(jié)肌膚癥、皮膚瘙癢癥、濕熱型慢性濕疹等皮膚病。本課題依據(jù)中藥新藥臨床前藥效學(xué)評(píng)價(jià)的技術(shù)要求,研究了祛風(fēng)止癢顆粒功能主治相關(guān)的主要藥理作用,并且討論了可能存在的作用機(jī)制,以期為該制劑的臨床研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法:
　　 1.試驗(yàn)藥物
　　 祛風(fēng)止癢顆粒,由東方藥林藥業(yè)有限公司提供；皮敏消膠囊,沈陽(yáng)澳華制藥有限公司；撲爾敏,廣州康和藥業(yè)有限公司；醋酸地塞米松,浙江仙琚制藥股份有限公司

3、。
　　 2.動(dòng)物
　　 昆明種小鼠,SPF級(jí),18-22g,雌雄各半；SD大鼠,SPF級(jí),160-200g,雌雄各半；90-100g,雄性；豚鼠,清潔級(jí),200-300g,雌雄各半；由南方醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供,合格證號(hào):SCXK粵2006-0015。
　　 3.觀察指標(biāo):
　　 3.1 祛風(fēng)止癢顆?？棺儜B(tài)反應(yīng)的實(shí)驗(yàn)研究
　　 3.1.1 祛風(fēng)止癢顆粒對(duì)大鼠同種被動(dòng)皮膚過敏實(shí)驗(yàn)的影響
　

4、　 3.1.2 祛風(fēng)止癢顆粒對(duì)大鼠顱骨骨膜肥大細(xì)胞脫顆粒的影響
　　 3.2 祛風(fēng)止癢顆粒對(duì)非免疫性接觸性蕁麻疹的影響
　　 3.2.1 祛風(fēng)止癢顆粒對(duì)二甲基亞砜致豚鼠耳腫脹的影響
　　 3.2.2 祛風(fēng)止癢顆粒對(duì)桂皮酸致豚鼠耳腫脹的影響
　　 3.3 祛風(fēng)止癢顆粒對(duì)外源性藥物致動(dòng)物皮膚瘙癢的影響
　　 3.3.1 祛風(fēng)止癢顆粒對(duì)右旋糖酐致小鼠皮膚瘙癢的影響
　　 3.3.2 祛風(fēng)止癢顆

5、粒對(duì)組織胺致豚鼠皮膚瘙癢的影響
　　 3.3.3 祛風(fēng)止癢顆粒對(duì)4-氨基吡啶致小鼠皮膚瘙癢的影響
　　 3.4 祛風(fēng)止癢顆?？寡鬃饔醚芯?br>　　 3.4.1 祛風(fēng)止癢顆粒對(duì)大鼠毛細(xì)血管通透性的影響
　　 3.4.2 祛風(fēng)止癢顆粒對(duì)二甲苯致小鼠耳腫脹的影響
　　 3.5 祛風(fēng)止癢顆粒抗Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)機(jī)制探討
　　 3.5.1 祛風(fēng)止癢顆粒對(duì)Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)大鼠血清中IFN-γ含量的影響
　　

6、 3.5.2 祛風(fēng)止癢顆粒對(duì)Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)大鼠血清中IL-4含量的影響
　　 3.5.3 祛風(fēng)止癢顆粒對(duì)Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)大鼠血清中IgE含量的影響
　　 4.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析:
　　 采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差((X)±s)表示。結(jié)果比較運(yùn)用重復(fù)測(cè)量方差分析,單因素方差分析(One-way ANOVA),組間多重比較方差齊時(shí)采用LSD法,不齊時(shí)用Dunnett's T3。以P≤0.05為差異有統(tǒng)計(jì)

7、學(xué)意義。
　　 結(jié)果:
　　 1.祛風(fēng)止癢顆粒抗變態(tài)反應(yīng)的實(shí)驗(yàn)研究
　　 1.1 祛風(fēng)止癢顆粒對(duì)大鼠同種被動(dòng)皮膚過敏實(shí)驗(yàn)的影響各組大鼠1:1抗血清注射點(diǎn)皮膚吸光度值經(jīng)One-way ANOVA分析組間有顯著性差異(F=3.776,P=0.005),需進(jìn)一步兩兩比較；1:2抗血清注射點(diǎn)皮膚吸光度值經(jīng)One-way ANOVA分析組間沒有顯著性差異(F=1.922,P=0.106)。結(jié)果:1:1抗血清注射點(diǎn),撲爾敏組

8、與模型組比較有顯著性差異(P<0.01),皮敏消膠囊組、祛風(fēng)止癢顆粒高、中、低劑量組與模型組比較也有顯著性差異(P<0.05),各給藥組均可降低抗血清引起的大鼠背部皮膚藍(lán)斑的吸光度值。
　　 1.2 祛風(fēng)止癢顆粒對(duì)大鼠顱骨骨膜肥大細(xì)胞脫顆粒的影響各組大鼠顱骨骨膜肥大細(xì)胞脫顆粒率經(jīng)One-way ANOVA分析組間有顯著性差異(F=154.57,P=0.000),需進(jìn)一步兩兩比較。結(jié)果:模型組與空白組比較有顯著性差異,顱骨骨膜肥大

9、細(xì)胞脫顆粒率顯著增加,造模成功；撲爾敏組、皮敏消膠囊組、祛風(fēng)止癢顆粒高、中劑量組與模型組比較有顯著性差異(P<0.01),祛風(fēng)止癢顆粒低劑量組也有顯著性差異(P<0.05),各給藥組均可使抗血清所致的大鼠顱骨骨膜肥大細(xì)胞脫顆粒率降低。
　　 2.祛風(fēng)止癢顆粒對(duì)非免疫性接觸性蕁麻疹的影響
　　 2.1 祛風(fēng)止癢顆粒對(duì)二甲基亞砜致豚鼠耳腫脹的影響各組豚鼠在各時(shí)間點(diǎn)耳廓腫脹程度采用重復(fù)測(cè)量和單因素方差分析,時(shí)間點(diǎn)和組別之間沒有

10、交互效應(yīng)(F=0.762,P=0.716)；組別之間有主效應(yīng)(F=3.548,P=0.008)；各時(shí)間點(diǎn)之間有主效應(yīng)(F=121.580,P=0.000),需進(jìn)行兩兩比較。結(jié)果表明,除45min點(diǎn)祛風(fēng)止癢顆粒低劑量組,120min、180min點(diǎn)祛風(fēng)止癢顆粒中、低劑量組外,與模型組比較,其余各給藥組均可減輕二甲基亞砜所致豚鼠耳腫脹(P<0.05)。
　　 2.2 祛風(fēng)止癢顆粒對(duì)桂皮酸致豚鼠耳腫脹的影響各組豚鼠在各時(shí)間點(diǎn)耳廓腫脹程

11、度采用重復(fù)測(cè)量和單因素方差分析,時(shí)間點(diǎn)和組別之間有交互效應(yīng)(F=3.746,P=0.000):組別之間有主效應(yīng)(F=8.773,P=0.000)；各時(shí)間點(diǎn)之間有主效應(yīng)(F=497.646,P=0.000),需進(jìn)行兩兩比較。結(jié)果表明,除15min,30min時(shí)間點(diǎn)各給藥組,120min點(diǎn)的祛風(fēng)止癢顆粒低劑量組,180min的祛風(fēng)止癢顆粒中、低劑量組外,其余各給藥組均具有顯著性差異(P<0.05),使桂皮酸致豚鼠耳腫脹度降低。
　　

12、 3.祛風(fēng)止癢顆粒對(duì)外源性藥物致動(dòng)物皮膚瘙癢的影響
　　 3.1 祛風(fēng)止癢顆粒對(duì)右旋糖酐致小鼠皮膚瘙癢的影響各組小鼠30min內(nèi)皮膚搔癢次數(shù)經(jīng)One-way ANOVA分析組間有顯著性差異(F=5.662,P=0.000)；30min內(nèi)皮膚搔癢持續(xù)時(shí)間經(jīng)One-way ANOVA分析組間也有顯著性差異(F=2.603,P=0.024),均需進(jìn)一步兩兩比較(采用LSD法)。結(jié)果:模型組與空白組比較,30min內(nèi)皮膚搔癢次數(shù)明顯增加

13、(P<0.01),搔癢持續(xù)時(shí)間明顯延長(zhǎng)(P<0.01)；撲爾敏、皮敏消膠囊和祛風(fēng)止癢顆粒高、中劑量組與模型組比較有顯著性差異(P<0.01),祛風(fēng)止癢顆粒低劑量組與模型組比較有顯著性差異(P<0.05),使右旋糖酐所致小鼠搔癢次數(shù)減少,持續(xù)時(shí)間縮短。
　　 3.2 祛風(fēng)止癢顆粒對(duì)磷酸組胺致豚鼠皮膚瘙癢的影響各組豚鼠需涂抹組胺次數(shù)經(jīng)One-way ANOVA分析組間有顯著性差異(F=8.073,P=0.000)；涂抹組胺用量經(jīng)On

14、e-way ANOVA分析組間也有顯著性差異(F/Welch=12.935,P=0.000)；均需進(jìn)一步兩兩比較。結(jié)果:祛風(fēng)止癢顆粒高、中、低劑量組與模型組比較(P<0.05),撲爾敏組與模型組比較(P<0.01),涂抹組胺用量增加；除皮敏消膠囊組外,撲爾敏組、祛風(fēng)止癢顆粒高、中、低劑量組與模型組比較,涂抹組胺次數(shù)增加(P<0.01)。
　　 3.3 祛風(fēng)止癢顆粒對(duì)4-氨基吡啶致小鼠皮膚瘙癢的影響各組小鼠涂抹4-氨基吡啶后10m

15、in內(nèi)皮膚搔癢次數(shù)經(jīng)One-way ANOVA分析組間有顯著性差異(F=3.905,P=0.004),皮膚搔癢持續(xù)時(shí)間經(jīng)One-way ANOVA分析組間也有顯著性差異(F=9.631,P=0.000)；均需進(jìn)一步兩兩比較。結(jié)果:撲爾敏組、皮敏消膠囊組、祛風(fēng)止癢顆粒高、中、低劑量組與模型組比較皮膚搔癢次數(shù)減少,有顯著性差異(P<0.01)；撲爾敏組、皮敏消膠囊組、祛風(fēng)止癢顆粒高、中劑量組與模型組比較皮膚搔癢持續(xù)時(shí)間縮短,也有顯著性差異(

16、P<0.01)。
　　 4.祛風(fēng)止癢顆?？寡鬃饔玫膶?shí)驗(yàn)研究
　　 4.1 祛風(fēng)止癢顆粒對(duì)大鼠毛細(xì)血管通透性的影響各組大鼠皮膚吸光度值經(jīng)One-way ANOVA分析組間有顯著性差異(F=11.390,P=0.000),需進(jìn)一步兩兩比較。結(jié)果:撲爾敏組、皮敏消膠囊組、祛風(fēng)止癢顆粒高、中、低劑量組與模型組比較有顯著性差異,吸光度值降低(P<0.01)。
　　 4.2 祛風(fēng)止癢顆粒對(duì)二甲苯致小鼠耳腫脹的影響各組小鼠耳腫

17、脹度經(jīng)One-way ANOVA分析組間有顯著性差異(F=4.873,P=0.001),需進(jìn)一步兩兩比較。結(jié)果:醋酸地塞米松組、皮敏消膠囊組、祛風(fēng)止癢顆粒高劑量組與模型組比較有顯著性差異,可減輕二甲苯所致小鼠耳腫脹程度(P<0.05)。
　　 5.祛風(fēng)止癢顆?？耿裥妥儜B(tài)反應(yīng)的機(jī)制探討
　　 5.1 祛風(fēng)止癢顆粒對(duì)Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)大鼠血清中IFN-γ、IL-4含量的影響各組大鼠血清中IFN-γ,含量經(jīng)One—way ANOVA

18、分析組間有顯著性差異(F=3.111,P=0.010),需進(jìn)一步兩兩比較。結(jié)果:模型組與空白組比較,有顯著性差異(P<0.01),IFN-γ含量減少:撲爾敏組、皮敏消膠囊組、祛風(fēng)止癢顆粒高、中、低劑量組與模型組比較也有顯著性差異(P<0.05),各給藥組均可使Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)大鼠血清中IFN-γ含量增加。
　　 各組大鼠血清中IL-4含量經(jīng)One-way ANOVA分析組間有顯著性差異(F=3.468,P=0.005),需進(jìn)一步兩兩

19、比較。結(jié)果:模型組與空白組比較,有顯著性差異(P<0.01),IL-4含量增加；撲爾敏組、皮敏消膠囊組、祛風(fēng)止癢顆粒高、中劑量組與模型組比較也有顯著性差異(P<0.05),降低Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)大鼠血清中IL-4含量。
　　 大鼠血清中的IFN-γ/IL-4含量經(jīng)One-way ANOVA分析組間有顯著性差異(F=6.118,P=0.000),需進(jìn)一步兩兩比較。結(jié)果:模型組與空白組比較,有顯著性差異(P<0.01),比值減小；撲爾敏組

20、、皮敏消膠囊組、祛風(fēng)止癢顆粒高、中劑量組與模型組比較有顯著性差異(P<0.01),比值增加。
　　 5.2 祛風(fēng)止癢顆粒對(duì)Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)大鼠血清中IgE含量的影響各組大鼠血清中IgE含量經(jīng)One-way ANOVA分析組間有顯著性差異(F=11.343,P=0.000),需進(jìn)一步兩兩比較。結(jié)果:模型組與空白組比較,有顯著性差異(P<0.01),IgE含量增加；撲爾敏組、皮敏消膠囊組、祛風(fēng)止癢顆粒高、中、低劑量組與模型組比較也有顯著

21、性差異(P<0.01),IgE含量減少。
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)論:
　　 1.祛風(fēng)止癢顆粒具有抗過敏作用:能夠抑制大鼠同種被動(dòng)皮膚過敏反應(yīng),抑制大鼠顱骨骨膜肥大細(xì)胞脫顆粒,可對(duì)抗非免疫性接觸性蕁麻疹。
　　 2.祛風(fēng)止癢顆粒具有止癢作用:可抑制右旋糖酐和4-氨基吡啶致小鼠皮膚瘙癢,增加豚鼠耐受磷酸組胺量。
　　 3.祛風(fēng)止癢顆粒具有抗炎作用:能抑制磷酸組胺所致的大鼠毛細(xì)血管通透性增加以及二甲苯所致的小鼠耳腫脹。<