煙草轉(zhuǎn)基因研究及其品系的選育.pdf

1、花發(fā)育機制是當前植物分子生物學研究的熱點之一，也是植物分子育種的基礎之一。煙草是花發(fā)育研究的模式植物，其花發(fā)育的研究以及通過轉(zhuǎn)基因手段獲得變異植株，為花發(fā)育的基礎研究奠定基礎。本試驗選取野生型煙草，以根癌農(nóng)桿菌EHA105菌株為介導，將干涉PMADS3基因C和M區(qū)的基因片段，以葉盤轉(zhuǎn)化法轉(zhuǎn)化煙草，獲得轉(zhuǎn)基因植株，并從形態(tài)、分子和遺傳方面分析外源基因?qū)χ参锘ㄐ偷挠绊?，為其基因的功能研究提供依?jù)。應用實驗室保存的轉(zhuǎn)基因煙草，通過雜交和重復轉(zhuǎn)

2、化的方法，初步研究了煙草的多基因轉(zhuǎn)化。通過早花煙草的品系選育，創(chuàng)造出新的煙草品系，為進一步研究外源基因的功能及遺傳提供可用材料。主要結果如下：
　　 1．通過農(nóng)桿菌介導的葉盤轉(zhuǎn)化法，轉(zhuǎn)干涉C和M區(qū)基因片段的煙草有明顯重瓣現(xiàn)象，與野生型相比，轉(zhuǎn)基因煙草花型發(fā)生了變化，表現(xiàn)為3種重瓣強度：僅花藥瓣化、部分花絲瓣化和全部花絲瓣化。對T0代和T1代進行PCR檢測到陽性植株，說明外源基因的導入引起的花型變化可以通過自交遺傳給下一代。

3、>　　 2．初步驗證雜交可以實現(xiàn)多基因轉(zhuǎn)化。以實驗室保存的轉(zhuǎn)PFT基因和FBP21基因的早花煙草分別為母本和父本進行雜交，對F1和F2代煙草植株的抗生素篩選和PCR檢測結果發(fā)現(xiàn)，部分植株同時存在兩種抗性基因，且雜交后代的花色、花型和果實形狀出現(xiàn)了介于父母本之間的表型。
　　 3．初步驗證重復轉(zhuǎn)化法可以實現(xiàn)多基因轉(zhuǎn)化。以實驗室保存的轉(zhuǎn)paFT基因的早花煙草為受體，轉(zhuǎn)入GUS報告基因，通過對T0代和T1代的GUS染色、株高花期觀測