河北地區(qū)Rh弱D表型分布與基因分型研究.pdf

1、目的:Rh血型系統(tǒng)是最復雜的紅細胞血型系統(tǒng)，在臨床輸血中的重要性僅次于ABO血型系統(tǒng)。目前已經確定的Rh系統(tǒng)抗原多達40多個。位于人類染色體1p34.3-36.1的RHD基因和RHCE基因分別編碼Rh血型系統(tǒng)的抗原RhD和RhC/c、RhE/e，其中D抗原在輸血醫(yī)學和產科學中的意義最為顯著。一般稱D抗原陰性的為Rh陰性血型，D抗原陽性的為Rh陽性血型。弱D表型是指D抗原表位都存在，抗原表位無質量變化，僅僅是抗原表位數量減少，這種只是由于

2、數量變化而導致的弱反應性D抗原，統(tǒng)稱為弱D。有關弱D表型的分布與基因分型研究結果各地并不一致，且大部分報道集中在中國臺灣人群，國內只有南方地區(qū)弱D表型的分布與基因分型研究。對于河北地區(qū)人群中Rh弱D的分布及其分子背景的研究尚不全面，因此本研究對河北人群弱D表型做了血清學鑒定，并用序列分析方法對其分子機理進行了研究。
　　Rh血型系統(tǒng)中最重要的抗原有5種，分別是:C、c、D、E、e抗原。其中以D抗原的免疫原性最為強烈。D抗原表達弱的

3、紅細胞可能刺激D陰性受血者產生抗體，臨床上確實見到過受血者被弱D抗原致敏，發(fā)生溶血性反應的病例，這已經引起臨床醫(yī)護工作者與科研人員的重視?！睹绹斞獏f(xié)會血庫和輸血機構標準》要求對獻血者的標本檢驗是否是弱D表型，對受血者血清中已有抗-D時，切不可輸用弱D型紅細胞，因該受血者血清抗-D會極快地破壞輸入的弱D型紅細胞，因此，揭示弱D表型的遺傳背景及基因多態(tài)性，設計相應的PCR試驗準確而高效地檢測弱D表型，是提高臨床輸血安全性的重要手段。

4、>　　本研究將對河北地區(qū)隨機抽取的Rh陰性獻血者血樣進行血清學篩選，分析篩選出的弱D表型的分子遺傳學背景。實驗均在河北省血液中心配型實驗室進行，通過本項目中的血清學篩選，我們可以了解河北地區(qū)Rh陰性獻血者中弱D的分布比例，通過分子背景的研究，我們能夠發(fā)現弱D的遺傳多態(tài)性，希望能發(fā)現新的等位基因則更有意義。通過該項目的研究，將弱D的基因檢測作為今后河北地區(qū)弱D表型基因分型的鑒定方法，以便于將來根據弱D抗原的分子基礎，更合理有效安全的使用弱

5、D血液。
　　方法:
　　1、用標準血型血清學方法對78000名河北省血液中心的獻血者進行RhD抗原鑒定，對初篩為Rh陰性結果的，再用三種不同來源的抗D血清以抗人球蛋白方法進行RhD抗原確定。
　　2、制備基因組DNA及Rh表現型
　　采用微柱法從214例Rh陰性獻血者全血中提取高純度基因組DNA。并對其進行DNA濃度以及純度的檢測。
　　3、序列特異性引物PCR(sequence specific pri

6、mers，PCR-SSP)，以HGH(human growth hormone，HGH)為內對照，對RHD基因第3、4、5、6、7、9特異性外顯子進行等位基因特異性PCR擴增。將PCR產物行2.5％瓊脂糖凝膠電泳后，根據PCR產物的有無以及片段的長短，判定是否存在RHD基因表位的缺失。
　　4、基因檢測
　　采用天津市秀鵬生物技術開發(fā)有限公司研制的《人類紅細胞RHD血型弱D、部分D基因檢測試劑盒》對表位缺失樣本進行分析。

7、r>　　結果:
　　1、血型血清學實驗
　　在78000名河北省血液中心的獻血者樣本中經血型血清學方法鑒定Rh陰性的人為214例，占正常人群的比例為0.275％，35人為Rh弱D型，占正常人群的比例為0.045％。
　　2、對214例Rh陰性個體做血型血清學分型，全小因子ccee表型為88例，Ccee表型67例，ccEe表型24例，CcEe表型15例，CCee表型12例， ccEE表型8例。
　　3、PCR-SS

8、P擴增結果顯示河北漢族群體RhD陰性基因外顯子存在著明顯的多態(tài)性。在35例弱D樣本中，30例RhD基因外顯子完整，5例樣本RhD基因外顯子部分缺失。
　　4、在30例RhD基因外顯子完整的樣本中檢出27例弱D15型、3例弱D24型;5例部分D缺失中，檢出3例為RHD基因2-9外顯子融合，表示為RHD-CE(2-9)-D;1例樣本檢測為D Cat.Ⅴa type2;1例樣本為D Cat.Ⅵtype2。
　　結論:
　　1

9、、在河北地區(qū)78000獻血員人群中，常規(guī)血型血清學鑒定的RhD陰性者為214例，占正常人群的比例為0.275％，其中檢出35例弱D型，占正常人群的比例為0.045％。
　　2、214例Rh陰性樣本的Rh表現型
　　全小因子ccee表型88例，Ccee表型67例，ccEe表型24例，CcEe表型15例，CCee表型12例， ccEE表型8例。
　　3、35例弱D型中檢出30例RhD基因外顯子完整，其中27例弱D15型、3