三葉斑潛蠅氣味結合蛋白的鑒定及功能研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、三葉斑潛蠅Liriomyza trifolu,是一種多食性的世界性害蟲,危害多種蔬菜、花卉,造成產(chǎn)量和品質(zhì)下降。氣味結合蛋白(odorant binding protein,OBP)是一類存在于昆蟲嗅覺感器淋巴液中的小分子酸性蛋白,特異性識別氣味分子,并將化學信號傳遞到受體,引發(fā)嗅覺反應。本研究通過對三葉斑潛蠅進行轉錄組測序,鑒定并克隆氣味結合蛋白基因,對其時空表達情況進行分析,進行原核表達及純化,研究其氣味結合特性及免疫定位情況,為三

2、葉斑潛蠅氣味結合蛋白研究及其嗅覺機制提供理論依據(jù),為綠色防治三葉斑潛蠅提供新的思路和方法。
  通過對轉錄組測序結果進行篩選和驗證,最終得到9個三葉斑潛蠅氣味結合蛋白基因,命名為LtriOBP1-9,分為三個亞家族.7個Classic OBPs,1個Minus-C OBP和1個Dimer OBP,而9個三葉斑潛蠅OBPs的無根進化樹顯示其之間的同源性較低,但與美洲斑潛蠅的氣味結合蛋白具有非常高的同源性。
  采用qPCR技術

3、,對其進行時空表達分析發(fā)現(xiàn)在不同發(fā)育階段,LtriOBP5在幼蟲期大量表達,LtriOBP4在蛹期大量表達,剩下的7個LtriOBPs均在成蟲期大量表達,且雄蟲表達量均高于雌蟲,雄蟲表達量隨日齡上升或者下降。在不同組織部位中,除了在觸角中特異性表達,還有的在頭部,足部具有一定的表達量。LtriOBPs時空表達的差異性,側面反映出其不僅參與嗅覺過程,還參與味覺反應、生長發(fā)育等過程相關。
  為了進一步研究得到的三葉斑潛蠅氣味結合蛋白

4、的蛋白功能,對7個三葉斑潛蠅氣味結合蛋白進行了原核表達及純化,獲得了具有高純度的目的蛋白。
  使用1-NPN為熒光探針,測定LtriOBP1-7與25種氣味物質(zhì)的結合能力。LtriOBP1與13種氣味物質(zhì)有結合,其中與β-紫羅蘭酮,亞油酸有較強的結合能力,LtriOBP2與21種氣味物質(zhì)有結合,其中與β-紫羅蘭酮,1-辛烯-3-醇,苯并噻唑結合能力最強;LtriOBP3與9種氣味物質(zhì)有結合,與β-紫羅蘭酮結合能力較強,LtriO

5、BP4只與3種氣味物質(zhì)苯并噻唑,芳樟醇,對乙基苯乙酮有結合,且結合能力均較弱;LtriOBP5只與3種氣味物質(zhì)·α-紫羅蘭酮,亞油酸,亞麻酸有結合,其中與亞麻酸結合能力最強,LtriOBP6與8種氣味物質(zhì)有結合,其中與芳樟醇,亞油酸有較強結合能力,LtriOBP7與21種氣味物質(zhì)均有較強的結合能力,其中與油酸,β-紫羅蘭酮,亞油酸有很強的結合能力。三葉斑潛蠅氣味結合蛋白的結合特性為其引誘劑和驅避劑的開發(fā)利用提供參考。
  利用冷凍

6、切片、免疫熒光染色技術對LtriOBP1-7在三葉斑潛蠅頭部、口器、前足附節(jié)及幼蟲和蛹中的蛋白分布情況進行研究。在對觸角鞭節(jié)的蛋白定位中發(fā)現(xiàn),毛形感器和腔錐感器存在著多種具有廣譜性結合氣味物質(zhì)能力的LtriOBPs,表明這兩種感器可能參與三葉斑潛蠅對寄主植物的識別、定位過程等多種嗅覺反應。而錐形感器中存在的OBPs對氣味更具有選擇性,表明錐形感器可能參與特異性的氣味識別過程。此外,還發(fā)現(xiàn)LtriOBP2、5分布于觸角的梗節(jié)中,說明梗節(jié)也

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