兩種尸食性蠅類幼蟲血淋巴可溶性蛋白組成的時間特征.pdf

1、目的：研究石家莊地區(qū)夏秋季優(yōu)勢蠅種絲光綠蠅Luciliasericata和大頭金蠅Chrysomya megacephala的生長發(fā)育規(guī)律，探討不同溫度條件下兩種蠅類幼蟲體重、血淋巴可溶性蛋白的含量及組成隨日齡的變化規(guī)律，為法醫(yī)學(xué)推斷死后間隔時間(PMI)提供理論依據(jù)。 方法：從自然界誘捕兩種成蠅，帶回實驗室連續(xù)飼養(yǎng)，取第三代成蠅作為母代，在生化培養(yǎng)箱內(nèi)進行發(fā)育試驗，溫度設(shè)定為24℃、28℃、32℃，濕度為50％～60％，光周期

2、為12h：12h。以剛孵化的幼蟲為0日齡，從1日齡開始取樣，每隔24h取樣一次，直至50％以上幼蟲入土化蛹。 體重標(biāo)本的留?。好看瘟羧〔煌壏N的幼蟲10頭。用80℃的熱水燙死后取出用濾紙吸干多余水分，放入70％的甘油酒精中保存。從70％的甘油酒精保存液中取出幼蟲標(biāo)本，用濾紙吸干后用電子天平稱取各溫度下不同蠅種不同日齡幼蟲的體重。 血淋巴樣品的留?。好看稳〔煌壏N的幼蟲60頭，以75％酒精清洗兩次，冰蒸餾水清洗數(shù)次，用濾紙

3、吸干后放在載玻片上用解剖針小心刺破幼蟲的體壁，毛細吸管吸取流出的血淋巴滴入冰浴離心管中，以10000r/min低溫離心10min，取出上清液，置于-20℃冰箱保存?zhèn)溆谩?用722S可見分光光度計測定不同溫度下兩種蠅類各日齡幼蟲血淋巴蛋白質(zhì)的吸光度，根據(jù)Bradford法計算蠅幼蟲血淋巴蛋白質(zhì)的含量。用SDS-PAGE電泳的方法對血淋巴蛋白進行分離；用FR-980生物電泳圖像分析系統(tǒng)對各條蛋白帶進行電泳分析；將分析結(jié)果用SPSS1

4、1.5和EXCEL進行統(tǒng)計分析和作圖，處理圖片用PHOTOSHOP軟件。 結(jié)果： 1.兩種蠅類幼蟲期體重，血淋巴蛋白質(zhì)含量隨發(fā)育變化的時間特征 各溫度條件下幼蟲體重在發(fā)育初期隨著日齡的延長而顯著增加，到達最大值后隨著日齡的延長而稍有降低。24℃、28℃、32℃下絲光綠蠅幼蟲體重達到最大值的時間分別為5日齡、4日齡、4日齡；大頭金蠅為5日齡、4日齡、3日齡。蠅類幼蟲體重隨日齡的變化趨勢可以用三項式曲線Y=b0+b1

5、X+b2X2+b3X擬合，擬合效果較好。 各溫度下兩種蠅類幼蟲血淋巴蛋白質(zhì)的含量隨著日齡的延長而增加，在發(fā)育初期增長迅速，某一時間達到最高值后隨著日齡的延長有所下降。24℃、28℃、32℃下，絲光綠蠅幼蟲血淋巴蛋白質(zhì)含量達到最大值的時間為5日齡、4日齡、4日齡；大頭金蠅為4日齡、4日齡、3日齡。蠅類幼蟲血淋巴蛋白質(zhì)含量隨日齡的變化趨勢可以用三項式曲線Y=b0+b1X+b2X2+b3X3擬合，擬合效果較好。 2.溫度對兩種

6、蠅類幼蟲體重，血淋巴蛋白質(zhì)含量變化的影響 各溫度條件下，蠅類幼蟲體重在發(fā)育初期隨著日齡的延長而顯著增加，到達最大值后，隨著日齡的延長其體重稍有降低。但幼蟲體重達到最大值的時間隨著溫度的升高而縮短。 各溫度條件下，蠅類幼蟲血淋巴蛋白質(zhì)的含量在發(fā)育初期隨著日齡的延長而顯著增加，到達最大值后，隨著日齡的延長其含量有所降低。但隨著溫度的升高，蠅類幼蟲血淋巴蛋白質(zhì)含量達到最大值的時間縮短。 3.兩種蠅類幼蟲血淋巴可溶性蛋白

7、組成的時間特征 24℃、28℃、32℃下，兩種蠅類幼蟲血淋巴中均出現(xiàn)了13條清晰可見的蛋白帶，分別是A帶(230KDa)、B帶(79KDa)、C帶(73KDa)、D帶(46KDa)、E帶(40KDa)、F帶(37KDa)、G帶(31KDa)、H帶(絲光綠蠅28KDa，大頭金蠅27KDa)、I帶(絲光綠蠅27KDa，大頭金蠅22KDa)、J帶(絲光綠蠅22 KDa，大頭金蠅18KDa)、K帶(絲光綠蠅18KDa，大頭金蠅17KDa

8、)、L帶(13KDa)、M帶(11KDa)。這些蛋白帶的蛋白含量隨日齡的延長均呈規(guī)律性的變化。其中，A帶(230KDa)，(B+C)帶，G帶(31KDa)的含量變化差異較為顯著。這些蛋白帶在幼蟲各日齡間含量的差異具有應(yīng)用于蠅類幼蟲日齡推斷的價值。對血淋巴可溶性蛋白A帶(230KDa)的含量用Y=a+bX直線擬合其與日齡的關(guān)系，擬合效果較好。 結(jié)論： 1.不同溫度條件下絲光綠蠅，大頭金蠅幼蟲體重隨著日齡的延長而增加，到達最

9、大值后有所降低。但隨著溫度的升高其體重增加的速率加快，到達最大值的時間縮短，到達最大值后，溫度越高，其體重下降的越快。 2.不同溫度條件下絲光綠蠅，大頭金蠅幼蟲血淋巴蛋白質(zhì)含量隨著日齡的延長而增加，到達最大值后有所降低，但隨著溫度的升高其含量增加的速率加快，到達最大值的時間縮短，到達最大值后，溫度越高，其血淋巴蛋白的含量下降的越快。 3.兩種蠅類幼蟲血淋巴中均含有13條清晰可見的蛋白帶。各條蛋白帶隨著日齡的延長呈現(xiàn)規(guī)律性