兩種尸食性蠅類蛹期血淋巴可溶性蛋白組成的時間特征.pdf

1、目的：研究不同溫度下絲光綠蠅(Lucilia sericata)和大頭金蠅(Chrysomya megacephala)蛹期血淋巴可溶性蛋白組成及含量的時間特征，為刑事案件中死后間隔時間(Postmortem interval，PMI)的推斷提供科學(xué)依據(jù)。 方法：在河北醫(yī)科大學(xué)校園內(nèi)以兔內(nèi)臟誘捕絲光綠蠅和大頭金蠅成蠅，帶回實驗室，在培養(yǎng)箱內(nèi)連續(xù)飼養(yǎng)，以第三代成蠅作為母蠅開始實驗。用新鮮豬肉誘成蠅產(chǎn)卵，將所產(chǎn)新鮮卵移置于豬肉上，分

2、別置于24℃、28℃、32℃的培養(yǎng)箱中飼養(yǎng)，相對濕度保持在50％～60％，光周期為12:12小時。 當(dāng)幼蟲入土，蟲體縮短，對針刺無反應(yīng)，為蛹期第0天，隨機挑取20頭，電子天平定時稱重，結(jié)果用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，并對不同溫度下兩種尸食性蠅類蛹重與日齡的關(guān)系進(jìn)行曲線擬合。 收集不同溫度下兩種尸食性蠅類各日齡蛹的血淋巴，按Bradford比色法測定其A595，利用標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計算出樣品血淋巴中蛋白質(zhì)濃度，并對不同溫度下各蠅種蛹期

3、血淋巴蛋白質(zhì)濃度與日齡的關(guān)系進(jìn)行曲線擬合。 對不同溫度下兩種尸食性蠅類各日齡蛹的血淋巴進(jìn)行SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳，分離膠濃度為12％，積層膠濃度為5％。用FR-980生物電泳圖像分析系統(tǒng)對凝膠進(jìn)行掃描，并分析各蛋白質(zhì)分子量及含量的變化，選擇含量隨日齡呈規(guī)律性變化的蛋白質(zhì)作為日齡指標(biāo)，應(yīng)用SPSS11.5軟件建立不同溫度、不同蠅種蛹期各蛋白質(zhì)含量與日齡的回歸模型。 結(jié)果： 1.蛹重的變化不同溫度下絲光綠蠅和大頭

4、金蠅蛹重均隨曰齡的增加而下降，在蛹初期顯著下降，之后下降趨于平緩，至蛹期末期下降加快，以三次函數(shù)曲線模型的擬合效果最佳；而且溫度越高，下降趨勢越明顯。 2.蛹期血淋巴蛋白質(zhì)濃度與日齡的關(guān)系不同溫度下，絲光綠蠅和大頭金蠅蛹期血淋巴蛋白質(zhì)濃度隨日齡均呈逐漸下降趨勢，可用線性關(guān)系擬合；而且溫度越高，下降趨勢越明顯。建立溫度、日齡與蛹期血淋巴蛋白濃度的多元回歸模型，表明蛹期血淋巴蛋白質(zhì)濃度隨日齡的增長變化較大。 3蛹期血淋巴可溶

5、性蛋白組成的時間特征不同溫度下，兩種尸食性蠅類各日齡蛹的血淋巴中，都含有豐富的蛋白帶，且各蛋白帶的含量在生長發(fā)育過程中呈現(xiàn)一定的規(guī)律變化。 3.1絲光綠蠅不同溫度下，絲光綠蠅各日齡蛹的血淋巴中均出現(xiàn)17條清晰可見的蛋白帶，其分子量在13～230KD之間，其中A帶(230KD)、D帶(85KD)、L帶(28KD)、M帶(25KD)和N帶(20KD)的含量隨著日齡的增加呈逐漸降低的趨勢，而且D帶是所有蛋白帶中含量最高的條帶。同時建立

6、了以上各蛋白帶含量與日齡的線性回歸方程，均有統(tǒng)計學(xué)意義。 3.2大頭金蠅不同溫度下，大頭金蠅各日齡蛹的血淋巴中均出現(xiàn)15條清晰可見的蛋白帶，其分子量在14～230KD之間，其中A帶(230KD)、D帶(78KD)、G帶(38KD)和H帶(32KD)的含量隨著日齡的增加呈逐漸降低的趨勢，而且D帶是所有蛋白帶中含量最高的條帶。同時建立了以上各蛋白帶含量與日齡的線性回歸方程，均有統(tǒng)計學(xué)意義。 進(jìn)一步對有規(guī)律性變化的蛋白帶含量進(jìn)

7、行時間動態(tài)分析，建立各蛋白質(zhì)含量與日齡的線性回歸方程，表明血淋巴可溶性蛋白的組成及含量變化可有效用于尸食性蠅類蛹期目齡的推斷，并進(jìn)一步用于PMI的推斷。 結(jié)論： 1.不同溫度下絲光綠蠅和大頭金蠅蛹重均隨日齡的增加而下降，其中在蛹初期顯著下降，之后下降趨于平緩，至蛹期末期下降加快，以三次函數(shù)曲線模型的擬合效果最佳；而且溫度越高，下降趨勢越明顯。 2.不同溫度下絲光綠蠅和大頭金蠅蛹期血淋巴蛋白質(zhì)濃度隨日齡均呈逐漸下降

8、趨勢，可用線性關(guān)系擬合；而且溫度越高，下降趨勢越明顯。建立了溫度、日齡與蛹期血淋巴蛋白濃度的多元回歸模型，表明蛹期血淋巴蛋白質(zhì)濃度隨日齡的增長變化較大。 3.不同溫度下，絲光綠蠅各曰齡蛹的血淋巴中均出現(xiàn)17條清晰可見的蛋白帶，其中A帶(230KD)、D帶(85KD)、L帶(28KD)、M帶(25KD)和N帶(20KD)的含量隨日齡呈逐漸降低的趨勢；大頭金蠅各日齡蛹的血淋巴中均出現(xiàn)15條清晰可見的蛋白帶，其中A帶(230KD)、D