糖尿病大鼠單側(cè)迷路切除術(shù)后行為學(xué)及GLUT3、GLUT4、胰島素受體、APP在前庭核團(tuán)、海馬和小腦旁絨球分布變化的觀察比較.pdf

1、目的:
　　1.通過對(duì)單側(cè)迷路切除術(shù)后糖尿病大鼠前庭代償中行為學(xué)相關(guān)指標(biāo)評(píng)分以及糖尿病大鼠前庭肌誘發(fā)電位的結(jié)果分析，以期探索糖尿病病程對(duì)于前庭神經(jīng)反射通路和前庭代償建立的影響。
　　2.通過檢測四組（糖尿病組、對(duì)照組、糖尿病手術(shù)組、對(duì)照手術(shù)組）前庭核團(tuán)、海馬、小腦旁絨球葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白3(Glucose transporter3，GLUT3)和葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4(Glucose transporter4，GLUT4)的表達(dá)變化;

2、以期從細(xì)胞能量代謝的角度探索前庭代償?shù)臋C(jī)制及糖尿病的影響。
　　3.通過原位雜交方法檢測前庭核團(tuán)區(qū)、小腦旁絨球區(qū)有無胰島素受體-PmRNA和APP mRNA的表達(dá)。免疫組化的方法檢測上述相關(guān)區(qū)域有無β淀粉樣蛋白的表達(dá)，以期探索糖尿病促腦組織老化作用對(duì)于前庭中樞部分解剖區(qū)域可能的影響。
　　實(shí)驗(yàn)對(duì)象及方法:
　　用鏈脲佐菌素(streptozocin，STZ)造雄性SD大鼠糖尿病模型;手術(shù)破壞并氯仿注入內(nèi)耳造單側(cè)迷路切除

3、模型;分別針對(duì)不同糖尿病病程大鼠行頸肌前庭誘發(fā)肌源性電位（cervical Vestibular evoked potential，cVEMP）檢測，術(shù)后在不同時(shí)間點(diǎn)給予失衡癥狀評(píng)分。取糖尿病組12周隨機(jī)分兩組:假手術(shù)組和單側(cè)迷路切除組。正常大鼠隨機(jī)分兩組對(duì)照組和迷路切除組。于術(shù)后24小時(shí)，取腦組織，依據(jù)《大鼠腦立體定位圖譜（3版）》定位切片，選取前庭核團(tuán)區(qū)域、海馬、小腦旁絨球采用免疫組化和原位雜交的方法檢測葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白3、葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)

4、蛋白4、免疫組化方法檢測上述區(qū)域β淀粉樣蛋白;通過原位雜交方法檢測上述區(qū)域胰島素受體-PmRNA、APPmRNA。另取飼養(yǎng)18個(gè)月的雄性SD大鼠為老年組，同上定位并取相應(yīng)區(qū)域檢測。
　　結(jié)果:
　　1.cVEMP檢測示:隨著成模時(shí)間延長，糖尿病組從第8周開始，閾值、P1潛伏期、N1潛伏期與對(duì)照組比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)，表現(xiàn)為閾值升高和潛伏期延長。對(duì)照組與糖尿病不同時(shí)期組的P1-N1波間振幅不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0

5、.05)。
　　2.失衡癥狀評(píng)分示:糖尿病12周組失衡癥狀評(píng)分在術(shù)后12小時(shí)及以后的各時(shí)間點(diǎn)與對(duì)照組比較均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。
　　3.GLUT3、GLUT4免疫組化在前庭核團(tuán)、海馬、小腦旁絨球糖尿病假手術(shù)組、手術(shù)組和正常對(duì)照組、對(duì)照手術(shù)組組間比較。
　　GLUT3在前庭核團(tuán)區(qū)，糖尿病組、糖尿病手術(shù)組分別與對(duì)照組、正常手術(shù)組比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05);手術(shù)組（糖尿病、正常組）術(shù)后左右兩側(cè)比較無明顯統(tǒng)

6、計(jì)學(xué)差異(P＞0.05);糖尿病手術(shù)組兩側(cè)與正常大鼠術(shù)后兩側(cè)分別比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05);糖尿病手術(shù)組與老年大鼠組比較無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05);正常手術(shù)組與老年大鼠組比較有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＜0.01)。
　　比較海馬區(qū)GLUT3，糖尿病兩組之間無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05);對(duì)照組與正常手術(shù)組有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。糖尿病組與對(duì)照組和正常手術(shù)組比較均有明顯差異(P＜0.05);糖尿病手術(shù)組與對(duì)照組和正

7、常手術(shù)組比較均有明顯差異(P＜0.05)
　　比較小腦旁絨球GLUT3，糖尿病組與糖尿病手術(shù)組比較無顯著差異(P＞0.05);對(duì)照組與對(duì)照手術(shù)組比較有顯著差異(P＜0.05);糖尿病組、糖尿病手術(shù)組分別與對(duì)照組和對(duì)照手術(shù)組比較均有顯著差異(P＜0.05)。
　　GLUT4前庭核團(tuán)區(qū)，上述四組比較有顯著差異(P＜0.05)，根據(jù)秩均值大小排列，正常手術(shù)組＞糖尿病組＞糖尿病手術(shù)組＞對(duì)照組。GLUT4海馬區(qū)比較，四組比較有顯著差異

8、(P＜0.05);根據(jù)秩均值大小排列正常手術(shù)組＞對(duì)照組＞糖尿病手術(shù)組＞糖尿病組。小腦旁絨球區(qū)比較，四組比較無顯著差異(P＞0.05)。
　　GLUT3前庭核團(tuán)區(qū)原位雜交上述四組比較有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05);GLUT3海馬區(qū)原位雜交四組比較無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05); GLUT3絨球區(qū)原位雜交四組比較有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。GLUT4前庭核團(tuán)原位雜交四組比較無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05); GLUT4絨球區(qū)

9、原位雜交四組比較無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05); GLUT4海馬區(qū)原位雜交四組比較無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。
　　4.淀粉樣蛋白檢測糖尿病組未發(fā)現(xiàn)陽性表現(xiàn)。APPmRNA原位雜交前庭核團(tuán)區(qū):四組有顯著差異P＜0.05。根據(jù)秩均值大小排列糖尿病組(57.25)＞糖尿病手術(shù)組(43.42)＞對(duì)照手術(shù)組(44.35)＞對(duì)照組(32.48)。APP旁絨球區(qū):四組比較有顯著差異(P＜0.05)根據(jù)秩均值大小排列糖尿病組27.88＞

10、糖尿病手術(shù)組27.20＞對(duì)照組10.25＞對(duì)照手術(shù)組8.90。APP海馬區(qū):糖尿病組與對(duì)照組比較兩個(gè)獨(dú)立樣本T檢驗(yàn)兩組有顯著差異(P＜0.05)。APP前庭核團(tuán)區(qū)，糖尿病組與對(duì)照組、老年組比較:三組間有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異P＜0.05，根據(jù)秩均值大小排列糖尿病組36.32＞老年組29.45＞青年組22.74。線性回歸檢測:前庭肌誘發(fā)電位P1潛伏期與APP具有相關(guān)性，與GLUT3、GLUT4無明顯相關(guān);N1潛伏期與APP、GLUT3、GLUT4

11、無明顯相關(guān)性，閾值與APP，GLUT3、GLUT4無相關(guān)性。
　　5.胰島素受體-P mRNA原位雜交糖尿病組和老年組在前庭核團(tuán)區(qū)域比較無明顯差異(P＞0.05);糖尿病組和對(duì)照組比較在前庭核團(tuán)區(qū)域有明顯差異(P＜0.05);旁絨球糖尿病組和對(duì)照組無明顯差異(P＞0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.糖尿病病程對(duì)cVEMP檢測有影響，體現(xiàn)在刺激閾值升高、P1,N1波潛伏期的延長，而振幅無明顯差異。
　　2.隨著糖尿病

12、病程延長而靜態(tài)代償時(shí)間延長。
　　3.單側(cè)迷路破壞后，前庭核團(tuán)、海馬、小腦旁絨球區(qū)葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白有明顯變化，提示前庭代償期間該區(qū)域功能細(xì)胞基礎(chǔ)代謝可能發(fā)生改變。糖尿病對(duì)于上述區(qū)域的葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白3、4含量具有影響，可能降低上述區(qū)域神經(jīng)元的基礎(chǔ)代謝，從而對(duì)維持正常的前庭功能和代償建立起到負(fù)面作用。
　　4.前庭核團(tuán)和旁絨球存在胰島素受體mRNA，上述區(qū)域可能受周圍胰島素變化的影響，并由此發(fā)生相應(yīng)功能上的改變，糖尿病導(dǎo)致胰島素含