松乳菇系統(tǒng)發(fā)育與群體遺傳多樣性分析.pdf

1、PhylogeneticandPopulationGeneticDiversityAnalysisOfLactariusDelicioSUSCheny曲uaAthesissubmittedinpartialsatisfactionoftheRequirementsforthedegreeofMasterofSciencelnMicrobiologyCentralSouthUniversityofForestryandTechnology

2、498ShaoshanSouthRoad，TianxinDistrictChangshaHunan410004，PRCHINASupervisorProfessorLIUJun—angJune，2013摘要松乳菇是與松、杉、柏等樹木共生的外生菌根真菌，具有重要的食、藥用及生態(tài)價(jià)值。中國幅員遼闊，地理和氣候環(huán)境十分復(fù)雜，孕育了豐富的松乳菇種質(zhì)資源，國內(nèi)外已研究了其營養(yǎng)與活性成分、發(fā)酵與栽培技術(shù)等，但對其分子系統(tǒng)與遺傳多樣性還沒有進(jìn)行研究。

3、分子技術(shù)具有簡便、特異性高、準(zhǔn)確可靠的優(yōu)點(diǎn)己成為真菌遺傳學(xué)各領(lǐng)域的重要工具，越來越多地應(yīng)用于外生菌根真菌研究中。系統(tǒng)發(fā)育和遺傳多樣性是進(jìn)行菌種鑒別與保護(hù)的理論基礎(chǔ)。本論文通過單核苷酸多態(tài)性(SNP)和簡單重復(fù)序列區(qū)間標(biāo)記(ISSR)的方法研究了松乳菇ITS序列堿基種內(nèi)變異；松乳菇在乳菇屬內(nèi)的系統(tǒng)發(fā)育地位；松乳菇的遺傳多樣性及不同地理來源松乳菇間的親緣關(guān)系。得到的主要結(jié)果如下：(1)松乳菇ITS序列種內(nèi)堿基變異與松乳菇在乳菇屬內(nèi)的系統(tǒng)發(fā)育

4、地位。本研究提取江蘇、云南、江西、湖南、廣西、安徽、湖北地區(qū)的松乳菇、紅汁乳菇(Lhatsudake)、橙色乳菇(￡akahatsu)和鮭色乳菇(￡salmonicolor)的基因組DNA，擴(kuò)增ITS序列，并從genbank下載乳菇屬其它8個種的ITS序列，分別對松乳菇ITS序列的堿基組成、變異位點(diǎn)及堿基替換類型進(jìn)行分析，構(gòu)建乳菇系統(tǒng)發(fā)育樹。結(jié)果顯示：松乳菇ITS序列共有20bp長度的變化，堿基C、T含量大于G、A含量。變異位點(diǎn)ITS共

5、有99個(ITSl58個，58S4個，ITS237個)。松乳菇ITS序列中主要是T與C的轉(zhuǎn)換，轉(zhuǎn)換位點(diǎn)與顛換位點(diǎn)數(shù)分別為8個和5個。ITSl、58S、ITS2序列中轉(zhuǎn)換與顛換的比值R值分別為234，195，112?；贗TS序列計(jì)算不同地區(qū)松乳菇問的遺傳距離，江西與意大利、江西與西班牙，法國與西班牙序列間的遺傳距離最大為0012，云南和法國序列間遺傳距離最小0?？傮w上松乳菇在種內(nèi)具有較低的ITS變異，系統(tǒng)發(fā)育顯示松乳菇與紅汁乳菇、橙色乳

6、菇親緣關(guān)系較近(2)松乳菇的遺傳多樣性及不同地理來源松乳菇間的親緣關(guān)系分析。采用ISSR分子標(biāo)記技術(shù)，利用6條引物對供試的90株松乳菇的多樣性進(jìn)行分析。6條引物共擴(kuò)增出103條DNA片斷，不同引物擴(kuò)增出的條帶數(shù)在527條，平均每條引物擴(kuò)增條帶172條，片斷大小在0231KB之間，多態(tài)性性比率為864％，運(yùn)用NTSYSpc21軟件將供試菌株分類，地域聚類不明顯。POPGENE132計(jì)算供試菌株的觀察等位基因數(shù)為14215，平均每個位點(diǎn)的有