針對(duì)柯薩奇病毒和埃博拉病毒的藥物篩選及活性研究.pdf

1、雖然科學(xué)技術(shù)的進(jìn)步改變了我們的生存環(huán)境和生存空間，使得我們的生活更加豐富，便捷以及安逸，但全球性流行傳染病卻常常在提醒我們:我們生活在一個(gè)微生物的世界里，微生物（包括病毒，細(xì)菌，真菌等）以驚人的變異速度來(lái)適應(yīng)和抵抗藥物及人體免疫防御機(jī)制，導(dǎo)致感染疾病的大規(guī)模爆發(fā)和流行，因此我們必須加快新藥研制的步伐，期望能獲得活性好、毒副作用低的藥物來(lái)預(yù)防和治療病原菌感染引起的疾病。小分子化合物是藥物候選物的重要來(lái)源，目前新藥的研發(fā)仍然依賴(lài)基于靶點(diǎn)特異

2、的篩選模型對(duì)大規(guī)模的化合物庫(kù)篩選，從中發(fā)現(xiàn)活性化合物。本論文通過(guò)建立抗病毒篩選模型，從實(shí)驗(yàn)室前期構(gòu)建的化合物庫(kù)中尋找活性化合物，并對(duì)所篩選得到的活性化合物進(jìn)行作用機(jī)制的初步研究。病毒的侵染過(guò)程一般可以分為吸附、吸附與進(jìn)入、大分子合成、裝配與釋放5個(gè)階段，從病毒與宿主細(xì)胞表面接觸、釋放核酸進(jìn)入胞漿，到病毒的各個(gè)活性蛋白劫持宿主生物合成系統(tǒng)來(lái)完成自身結(jié)構(gòu)蛋白和基因組的復(fù)制，以及最后的組裝成子代病毒釋放，這一系列的過(guò)程均可以作為藥物設(shè)計(jì)的靶點(diǎn)

3、。本文針對(duì)兩個(gè)重要病毒柯薩奇病毒(Coxsackie virus)和埃博拉病毒(Ebola virus)進(jìn)行研究，它們都屬于小RNA病毒，并且都對(duì)人類(lèi)健康具有很大的危害性。其中埃博拉病毒包膜蛋白GP(Glycoprotein)在介導(dǎo)埃博拉病毒進(jìn)入受體細(xì)胞過(guò)程中發(fā)揮重要作用?？滤_奇病毒B亞型的3C蛋白酶與小RNA病毒蛋白的剪切過(guò)程有關(guān)，對(duì)柯薩奇病毒在宿主細(xì)胞內(nèi)的自我復(fù)制發(fā)揮著非常重要的作用，針對(duì)柯薩奇病毒B亞型的3C蛋白酶的抑制劑研究以及

4、針對(duì)埃博拉病毒包膜蛋白GP的抑制劑的研究都是抗病毒藥物的重要研究手段。
　　本研究分別通過(guò)基于熒光共振能量轉(zhuǎn)移(FRET)原理進(jìn)行體外的CVB3-3C蛋白酶抑制劑篩選，以及基于報(bào)告基因熒光素酶（luciferase）對(duì)攜帶埃博拉囊膜蛋白的假病毒EBOV-GP進(jìn)行了GP抑制劑的篩選。通過(guò)高通量篩選，獲得了7個(gè)具有較好活性的CVB3-3C蛋白酶非競(jìng)爭(zhēng)性可逆抑制劑，以及7個(gè)有顯著活性的EBOV-GP抑制劑，其中CVB3-3C蛋白酶抑制劑

5、的IC50在2.5μM～7.73μM之間，與蘆平曲韋(IC50=1.57μM)達(dá)到同一活性水平，顯示出良好的3C蛋白酶抑制活性。同時(shí)所篩選到的EBOV-GP抑制劑的IC50范圍為0.0257μM～1.071μM，其中化合物F0393-0147對(duì)EBOV-GP有特異性抑制效果。通過(guò)本研究，基于特異高通量篩選模型，分別對(duì)CVB3-3C蛋白酶和EBOV-GP進(jìn)行高通量藥物篩選，從實(shí)驗(yàn)室具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的6000個(gè)化合物中篩選出了多個(gè)具有活性的