MiRNA與柯薩奇病毒(CVB3)感染相關(guān)性研究.pdf

1、目的： 生物體利用RNA干擾作為一種天然的抗病毒機(jī)制。過去的幾年已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了在植物病毒、昆蟲病毒以及哺乳動(dòng)物病毒中都存在抵抗RNAi機(jī)制的一些蛋白因子。而最新的研究證明了某些病毒可以編碼其自身的miRNA或miRNA樣分子。此外，宿主編碼的miRNA也可以影響宿主細(xì)胞內(nèi)病毒的RNA水平。據(jù)此推測包括miRNA在內(nèi)的RNAi途徑和病毒的基因組之間的相互作用可以深刻影響病毒的生活周期及病毒本身的致病性。因此，我們深入研究了可能參與柯薩

2、奇病毒CVB3感染HeLa細(xì)胞過程的miRNA，并進(jìn)一步分析了這些miRNA對病毒與宿主細(xì)胞相互作用的影響。 方法： 利用miRNA克隆技術(shù)，檢測CVB3感染HeLa細(xì)胞之后是否誘導(dǎo)新的miRNA產(chǎn)生；應(yīng)用miRNA芯片技術(shù)，檢測CVB3感染的HeLa細(xì)胞中已知miRNA的表達(dá)水平；并在此基礎(chǔ)上應(yīng)用反義寡核苷酸技術(shù)及RNAi載體過表達(dá)miRNA方法對可能的一些候選miRNA分子進(jìn)行功能方面的研究。 結(jié)果：

3、 1應(yīng)用miRNA克隆技術(shù)從CVB3感染的HeLa細(xì)胞中克隆到了一系列小片段的候選miRNA。 2通過Northern印跡及生物信息學(xué)方法預(yù)測前體分子，最終確定了四個(gè)與CVB3感染相關(guān)的新的miRNA。 3通過miRNA芯片技術(shù)，篩選出CVB3感染的HeLa細(xì)胞中差異表達(dá)的8個(gè)已知miRNA，包括有表達(dá)上調(diào)的5個(gè)miRNA和表達(dá)下調(diào)的3個(gè)miRNA。 4通過對克隆到的CVB3感染相關(guān)的新miRNA——miRv-2