創(chuàng)傷弧菌快速檢測的增菌液和選擇性培養(yǎng)基的研制.pdf

1、目的：⑴制備創(chuàng)傷弧菌增菌液的特殊添加組分-酪酸梭菌細胞壁活性成分。⑵研制一種有利于創(chuàng)傷弧菌快速檢測增菌液。⑶在增菌液基礎上制備創(chuàng)傷弧菌的選擇性增菌培養(yǎng)基。
　　方法：①創(chuàng)傷弧菌菌株，編號QT689，來源于溫州醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院檢驗科。復蘇培養(yǎng)后，劃線接種于哥倫比亞血瓊脂平板，觀察其菌落形態(tài)，行革蘭染色，光鏡觀察，并接種于生化管觀察其生化特性。②酪酸梭菌細胞壁活性成分的制備，經(jīng)過酪酸梭菌菌體濃縮、高壓破壁、冷凍減壓、干燥、粉碎，得

2、到穩(wěn)定的可溶性黃白色粉末，即為CWAC。③實驗以3％氯化鈉堿性蛋白胨水（alkaline peptone water, APW）為基礎增菌液，以不同濃度的CWAC、MgCl2、KCl、Na2S2O3為研究對象，通過單因素實驗分析四種添加物對創(chuàng)傷弧菌生長的影響。并在此基礎上利用響應面法對實驗結(jié)果進行優(yōu)化。④在實驗的基礎上，添加纖維二糖、乳糖、Na2S2O3和多粘菌素B、多粘菌素 E為選擇性鑒別培養(yǎng)基的成分，并研究其對純菌液和混合菌液（創(chuàng)傷

3、弧菌101 CFU/mL，大腸桿菌103 CFU/mL，金黃色葡萄球菌103 CFU/mL）的靈敏性和特異度。
　　結(jié)果：⑴創(chuàng)傷弧菌QT689株在固體培養(yǎng)基上生長為典型粘液（M）型菌落，光鏡下為革蘭染色陰性弧狀菌，生化特性與文獻報道一致。⑵得到的CWAC為一種穩(wěn)定可溶性黃白色粉末，肽聚糖（Peptidoglycan，PG）作為細胞壁的主體，約占細胞壁干重的50-90%。⑶單因素結(jié)果顯示CWAC、MgCl2、KCl均能促進創(chuàng)傷弧菌的

4、生長，而Na2S2O3對創(chuàng)傷弧菌生長無明顯影響，經(jīng)響應面法分析后得增菌液最優(yōu)組合為：CWAC量為0.7 g/L（0.07%），MgCl2量為1.2 g/L（0.12%），KCl量為0.2 g/L（0.02%），在該條件下增菌培養(yǎng)基中創(chuàng)傷弧菌培養(yǎng)12 h培養(yǎng)液的OD600nm理論值為1.399，而對照組為0.391。⑷所設計的選擇性鑒別培養(yǎng)基，在選擇性的抑制大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的同時，能促進創(chuàng)傷弧菌的生長。而該培養(yǎng)基的檢測下限可達10

5、1 CFU/mL，并在6 h內(nèi)有效增菌。
　　結(jié)論：①酪酸梭菌細胞壁活性成分，即 CWAC可作為創(chuàng)傷弧菌增菌液的有效添加成分。②改良得到的優(yōu)化增菌液（0.07%CWAC,0.12%MgCl2, and0.02%KCl）相比于APW能有效起到快速增菌創(chuàng)傷弧菌的作用。③制備得到的創(chuàng)傷弧菌選擇性培養(yǎng)基（增菌液加0.6%纖維二糖，0.4%乳糖，0.06% Na2S2O3，100000 IU多粘菌素B和40000 IU多粘菌素E)能選擇性促