去卵巢SD大鼠血管及腰椎基質(zhì)Gla蛋白的表達(dá)及調(diào)節(jié)研究.pdf

1、目的：
　　 觀察去卵巢Sprague-Dawley大鼠血管及腰椎基質(zhì)Gla蛋白(MGP)表達(dá)及骨質(zhì)疏松治療藥物雌激素、維生素K2、甲狀旁腺激素對(duì)其表達(dá)的調(diào)節(jié)作用，探討MGP在血管鈣化和絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥共同發(fā)病機(jī)制中的作用。
　　 方法：
　　 60只10月齡雌性SD大鼠，隨機(jī)分成5組，假手術(shù)組、去卵巢(OVX)組、去卵巢加雌激素干預(yù)(E)組、去卵巢加維生素K2干預(yù)(VK2)組，去卵巢加PTH干預(yù)(PTH)組，每

2、組12只。E組手術(shù)3周后給予苯甲酸雌二醇肌肉注射(0.2mg/kg，隔天一次，持續(xù)12周)，VK2組手術(shù)3周給予維生素K2灌胃(30mg/kg，每周5次，持續(xù)12周)。PTH組手術(shù)3周后給予PTH皮下注射(20ug/kg，每周3次，持續(xù)12周)。各組大鼠在術(shù)前及用藥后每3周留取血清及尿液。18周后處死大鼠，HE染色觀察子宮、血管及腰椎組織變化，用DEXA測(cè)定大鼠腰椎的骨密度；酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法檢測(cè)血清及尿液中MGP的量及雌激素

3、的變化；原子分光光度計(jì)檢測(cè)各組血管總鈣含量；免疫組化法觀察血管及腰椎未羧化MGP(ucMGP)的表達(dá)，Von Kossa染色觀察動(dòng)脈鈣化；熒光實(shí)時(shí)定量PCR擴(kuò)增MGP基因，觀察血管及腰椎MGP mRNA的表達(dá)水平。
　　 結(jié)果：
　　 (1)骨質(zhì)疏松動(dòng)物模型構(gòu)建：去卵巢18周后，OVX組的子宮內(nèi)膜萎縮，血管鈣化程度及腰椎骨小梁結(jié)構(gòu)破壞最明顯，而假手術(shù)組無明顯改變，雌激素、VK2組及PTH組介于兩者之間。骨密度方面，維生素

4、K2組與OVX組之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，雌激素及PTH組與OVX組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。血中雌激素水平方面：去卵巢前各組無明顯差異(P>0.05)，處死前OVX組及藥物干預(yù)組明顯降低，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。假手術(shù)組無明顯變化。(2)血清及尿液中MGP含量變化：各組大鼠血清及尿液中MGP含量在去卵巢前，無明顯差異(P>0.05)，去卵巢后，假手術(shù)組血清MGP含量無明顯變化；其他各組均下降，OVX組最顯著，

5、用藥后6周，OVX組血清MGP含量無明顯變化，而各藥物干預(yù)組含量逐漸上升，藥物干預(yù)后3至12周除假手術(shù)組外的其他各組尿液中MGP的含量均下降，OVX組最顯著，各組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。處死時(shí)藥物干預(yù)組的尿液MGP含量上升，與OVX組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。(3)血管總鈣含量測(cè)定：OVX組較其他各組血管總鈣含量明顯升高(P<0.01)，假手術(shù)組和其他各組比較，血管總鈣含量最低(P<0.01)，藥物干預(yù)組的血管總鈣含

6、量介于OVX組及假手術(shù)組之間。VK2組及PTH組高于雌激素組(P<0.05)。(4)免疫組化切片及血管Von Kossa染色：血管ucMGP在血管鈣化嚴(yán)重部位表達(dá)明顯。腰椎OVX組ucMGP陽性表達(dá)明顯，其他各組表達(dá)不明顯。(5)熒光實(shí)時(shí)定量PCR：血管中MGP mRNA表達(dá)以假手術(shù)組最高，與其他各組比較差異有顯著性(P<0.01)；OVX組表達(dá)量最低，與其他各組比較差異有顯著性(P<0.01)。各藥物干預(yù)組之間稍有差別，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

7、(P>0.05)。腰椎中MGPmRNA表達(dá)量：OVX組較其他各組明顯增高差異有顯著性(P<0.01)，假手術(shù)組較其他各組降低差異有顯著性(P<0.01)。各藥物干預(yù)組之間稍有差別，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。(6)相關(guān)性分析：血管總鈣含量，骨密度，血管及腰椎中MGPmRNA相對(duì)表達(dá)量之間具有相關(guān)性。
　　 結(jié)論：
　　 (1)雌激素水平下降是絕經(jīng)后女性血管鈣化及骨質(zhì)疏松發(fā)生的一個(gè)重要致病因素。(2)MGP基因及蛋白的