17β-雌二醇及Wnt-β-catenin信號通路對人成骨肉瘤細胞基質(zhì)Gla蛋白表達的影響.pdf

1、目的:觀察17β-雌二醇(17β-E2)對人成骨肉瘤細胞(MG63)中基質(zhì)Gla蛋白(MGP)表達的影響,及Wnt/β-catenin信號通路在其中的作用,探討MGP在絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥中可能的分子機制。
　　方法:取人成骨肉瘤細胞MG63細胞株復蘇,于含5％CO2、370C培養(yǎng)箱中培養(yǎng),培養(yǎng)液為含有10%FBS的無酚紅MEM培養(yǎng)液,細胞達匯片后按5×105細胞/瓶接種于25cm2培養(yǎng)瓶,細胞培養(yǎng)液每2天換一次。MG63細胞體積達到

2、90%左右時,改用含1%BSA的無血清MEM培養(yǎng)液培養(yǎng)2天,再分別進行以下藥物干預:(1)17β-E210-10、10-8、10-6mol/l、ICI10-7mol/l、ICI10-7mol/l+17β-E210-8mol/l干預48小時;(2)17β-E210-8mol/l、DKK-1200ng/ml、17β-E210-8mol/l+DKK-1200ng/ml干預48小時;(3)17β-E210-8mol/l、華法林10-5mol/l

3、、17β-E210-8mol/l+華法林10-5mol/l干預48小時,均以1%BSA的無血清MEM培養(yǎng)液作為對照組,干預后提取RNA及總蛋白。用熒光實時定量RT-PCR及Western-blot技術(shù)檢測MGP、β-catenin、Runx2、LRP5基因及蛋白表達的情況。
　　結(jié)果:1、17β-E2能上調(diào)MGP的表達。10-10mol/l、10-8mol/l、10-6mol/l、MGP mRNA的表達是對照組的4.63倍、7.1

4、6倍、,2.95倍(P<0.05),MGP蛋白的表達分別是對照組的1.17倍、1.58倍、1.28倍,以10-8mol/l的濃度的作用最明顯,差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。10-7 mol/L雌激素受體抑制劑ICI182780與對照組相比MGP表達無顯著差異(P>0.05),與17β-E2聯(lián)合作用時可阻斷17β-E2的作用,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。2、17β-E2增加Wnt/β-catenin經(jīng)典信號通路中相關(guān)蛋白β-c

5、atenin、LRP5、Runx2的表達,Wnt/β-catenin信號通路抑制劑DKK-1下調(diào)β-catenin、LRP5、Runx2的表達,DKK-1與17β-E2聯(lián)用能抑制17β-E2對MGP的上調(diào)作用,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。3、MGP抑制劑華法林下調(diào)MGP的表達,同時華法林與17β-E2聯(lián)用能抑制17β-E2對β-catenin、LRP5、Runx2的上調(diào)作用,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　結(jié)論:17