第一部分：HECTD3預測及調(diào)控晚期卵巢漿液性腺癌鉑類化療敏感性的機制研究第二部分：保留盆腔自主神經(jīng)的宮頸癌根治術應用于局部晚期宮頸癌的臨床研究.pdf

1、本文主要從以下幾個部分展開論述:
　　第一部分 HECTD3預測及調(diào)控晚期卵巢漿液性腺癌鉑類化療敏感性的機制研究
　　目的:以卡鉑為基礎的聯(lián)合化療在卵巢癌治療中占有重要地位，而鉑類耐藥是導致卵巢癌預后不良的主要因素，尋找預測以及逆轉(zhuǎn)鉑類耐藥的分子靶點意義重大。前期研究中發(fā)現(xiàn)新型E3泛素連接酶HECTD3可保護細胞避免凋亡，并且在乳腺癌和宮頸癌中與鉑類耐藥相關。本文將對HECTD3在卵巢癌中的表達及參與鉑類耐藥的調(diào)控機制進行研

2、究。
　　方法:研究分四步進行，采用的實驗方法包括，1）收集2007年5月至2013年1月我院初治的晚期卵巢漿液性腺癌150例納入回顧性研究，手術標本制作成組織芯片。通過免疫組化染色(IHC)評價卵巢癌組織中HECTD3表達與其他臨床-病理因素的相關性;通過隨訪進行生存統(tǒng)計，并采用Kaplan-Meier法進行生存分析，Log-rank檢驗進行預后單因素分析，Cox回歸模型行進行預后多因素分析。2）采用蛋白印跡法(WB)對比SKO

3、V3及順鉑誘導的耐藥細胞系SKOV3R(DDP)中HECTD3的表達差異。通過流式檢測上述兩種細胞系對卡鉑誘導的凋亡差異。構(gòu)建HECTD3敲降的穩(wěn)轉(zhuǎn)SKOV3R及對照細胞系，應用AnnexinⅤ/PI雙染法通過流式細胞術檢測敲降株與對照株對卡鉑誘導細胞凋亡的差異。用上述細胞系構(gòu)建小鼠皮下荷瘤模型，給予卡鉑治療，對比腫瘤的抑制效果。3）選用Her2抑制劑（Lapatinib，Neratinib和Herceptin）分別處理SKOV3、SK

4、OV3R和A2780細胞系，WB檢測HECTD3和pSTAT3的表達情況。隨后，應用siRNA在SKOV3和A2780細胞中瞬時敲降Her2，并通過WB檢測Her2、HECTD3和pSTAT3的表達情況。進一步在組織水平通過IHC分析HECTD3與Her2的表達相關性。此外，在SKOV3細胞系中分別敲降STAT3及過表達STAT3，并通過WB檢測pSTAT3和HECTD3的表達情況。后通過雙熒光素酶報告基因檢測法定位STAT3影響HEC

5、TD3啟動子活性的序列。4）選用SKOV3細胞分別給予卡鉑單藥、拉帕替尼單藥及聯(lián)合藥物處理，通過流式細胞術檢測細胞凋亡差異;進而用SKOV3細胞系構(gòu)建小鼠皮下荷瘤模型，給予同上分組藥物處理，治療結(jié)束后剖取腫瘤大小對比拉帕替尼與卡鉑聯(lián)合與任一單藥的抑制效果差異。
　　結(jié)果:本研究發(fā)現(xiàn)，1）卵巢漿液性腺癌組織芯片IHC評分與臨床病理資料分析結(jié)果顯示鉑敏感或鉑耐藥復發(fā)與HECTD3的表達水平密切相關(P＜0.01)。在卵巢漿液性腺癌中H

6、ECTD3表達高，預后差。多因素分析結(jié)果顯示HECTD3的表達水平(P＜0.05)、FIGO分期(P＜0.05)和殘存腫瘤大小(P＜0.05)是PFS的獨立預后影響因素;僅HECTD3的表達水平(P＜0.05)是OS的獨立影響因素。2）在細胞水平研究發(fā)現(xiàn)，SKOV3R細胞系中HECTD3的表達顯著高于其親本SKOV3細胞系，且SKOV3R較SKOV3對卡鉑具有耐藥性。體外研究結(jié)果顯示，敲降HECTD3可提高SKOV3R對卡鉑誘導的細胞凋

7、亡;在體內(nèi)研究中同樣觀察到HECTD3表達降低可一定程度逆轉(zhuǎn)SKOV3R對卡鉑的敏感性。3）耐藥機制研究發(fā)現(xiàn)，Her2-STAT3信號通路參與調(diào)控HECTD3的表達，WB檢測發(fā)現(xiàn)抑制Her2可協(xié)同降低pSTAT3和HECTD3的表達水平。并證實STAT3可調(diào)節(jié)HECTD3的轉(zhuǎn)錄活性。此外，在組織水平通過IHC驗證Her2與HECTD3表達呈正相關（spearman相關系數(shù)為0.214，P=0.007）。4）拉帕替尼聯(lián)合高/低濃度的卡鉑較

8、卡鉑單藥在體外可顯著促進卵巢癌細胞的凋亡(A2780: CBP-HP=0.047; SKOV3: CBP-L P=0.045，CBP-H P=0.032)。拉帕替尼聯(lián)合卡鉑較任一單藥在體內(nèi)亦可顯著抑制卵巢癌腫瘤生長(CBP+L vs CBP P＜0.0001, CBP+L vs L P=0.0001)。
　　結(jié)論:綜上所述，HECTD3的表達與鉑類耐藥呈現(xiàn)正相關，是影響卵巢漿液性腺癌預后的獨立因素。降低HECTD3表達可提高卵巢癌

9、對鉑類藥物的敏感性。此外，HECTD3可通過STAT3接受Her2的正向調(diào)控，且在組織水平HECTD3與Her2表達呈正相關。Her2抑制劑可通過這一通路為鉑類治療增敏。因此，HECTD3具有作為卵巢漿液性腺癌分子標志物及治療靶點的潛質(zhì)。
　　第二部分 保留盆腔自主神經(jīng)的宮頸癌根治術應用于局部晚期宮頸癌的臨床研究
　　目的:評價Q-M分型體系中保留盆腔自主神經(jīng)的宮頸癌根治術(Nerve sparing radicalhyst

10、erectomy, NSRH)在局部晚期宮頸癌治療中的安全性及對預后的影響。
　　方法:采用回顧性隊列研究方法收集2008年1月至2014年12月于中國醫(yī)學科學院腫瘤醫(yī)院接受開腹NSRH（69例）和開腹傳統(tǒng)宮頸癌根治術（RH，320例）的局部晚期（Ⅰb2和Ⅱa2期）宮頸癌患者的臨床病理資料及手術參數(shù)，中位隨訪67個月，評價預后及術后膀胱功能恢復情況。
　　結(jié)果:兩組病例基本參數(shù)匹配，(1)多因素預后分析結(jié)果顯示盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移

11、是影響局部晚期宮頸癌患者DFS（HR=1.31，95％CI為1.01～1.68，P=0.040）和OS(HR=1.30，95％CI為1.01～1.67，P=0.046)的獨立預后危險因素。(2)手術保留盆腔自主神經(jīng)與否對局部晚期宮頸癌的無疾病進展生存(P=0.746)和總生存(P=0.910)均沒有影響;(3)對比RH組，NSRH組手術時間雖明顯延長(262±51min vs.245±52min，P＜0.01)，但出血量少（366±30