桑蠶絲素固定化多酶系統(tǒng)及其機(jī)理的研究.pdf

1、浙江大學(xué)博士學(xué)位論文桑蠶絲素固定化多酶系統(tǒng)及其機(jī)理的研究姓名：朱祥瑞申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：特種經(jīng)濟(jì)動(dòng)物飼料指導(dǎo)教師：徐俊良2000.5.1％。說(shuō)明絲素是較好的固定化酶材料。3本試驗(yàn)的葡萄糖異構(gòu)酶系自制，是通過(guò)培養(yǎng)黃微綠鏈霉菌(StreptomycesflavovirensA8)離心去除鏈霉菌后得到酶原液，其葡萄糖異構(gòu)酶的酶活力為476U／mg。原酶液經(jīng)過(guò)初步分離，去除不具活性部分，得到葡萄糖異構(gòu)酶的粗制品，其酶活力為11746U／ra

2、g。酶純化了25倍。4剛桑蠶絲素制備同定化酶時(shí)，可以通過(guò)堿處理絲素后，用物理吸附的：療法；也可以用常Hj的交聯(lián)劑一戊二醛進(jìn)行崮定。由于戊二醛對(duì)酶具有毒性，所以選擇它的濃度非常重要。試驗(yàn)表明，最適的戊二醛濃度在O25％比較合適。5經(jīng)固定化后的各種酶，其理化性質(zhì)均發(fā)生不同程度的變化。如酶促反應(yīng)的最適溫度，都得到了提高，幅度在5“c～I(xiàn)OC；最適pH因酶的不同其變化也有所不同葡萄糖異構(gòu)酶最適pH沒(méi)有發(fā)生改變，而淀粉酶和糖化酶的最適pH則往酸性

3、一側(cè)偏移，偏移幅度住O8～125個(gè)pH單位。6酶經(jīng)周定化后的最人變化就是可以反復(fù)使用。悄絲素蚓定后的酶，其操作、r衰刪都比較長(zhǎng)，同定化淀粉酶的操作半衰期為26～38d，固定化糖化酶的操作半衰期為45～54d，【刊定化葡萄糖異構(gòu)酶的操作、F衰期為44～50d。7酶經(jīng)鬧定化后，對(duì)生向質(zhì)變性荊的抵抗能力得到T／In強(qiáng)。當(dāng)例定化酶的相對(duì)酶活力保持在80％以上時(shí)，各種絲素l州定化酶對(duì)尿素的抵抗能力均住8mol／L。而對(duì)：t游離酶，當(dāng)尿素濃度達(dá)到2

4、mol／L時(shí)，酶活力已基本降至0。8游離酶經(jīng)I制定化后，其動(dòng)力學(xué)也會(huì)發(fā)生一些變化。經(jīng)對(duì)游離酶和【州定化酶的米氏常數(shù)測(cè)定發(fā)現(xiàn)，同定化糖化酶和同定化葡萄糖異構(gòu)酶的Km值均比游離酶的Km值略人，但它們的增加均在同一數(shù)鼙級(jí)內(nèi)。如游離的糖化酶的Km為2788x10一mmol／L，而向定化糖化酶的Km為3603810mmol／L～55369x104mmol／L；游離的葡萄糖異構(gòu)酶的Kin=23715xlo‘2mol／L，而同定化葡萄糖異構(gòu)酶的Km在