敲減OLFML2A基因?qū)Ω伟┘?xì)胞生物學(xué)行為的影響.pdf

1、摘要II摘要目的：目的：1、檢測(cè)OLFML2A基因在肝癌細(xì)胞株中的表達(dá)；2、構(gòu)建OLFML2A基因的RNAi慢病毒；3、檢測(cè)OLFML2ARNAi慢病毒感染肝癌BEL7404細(xì)胞后，細(xì)胞的增殖、細(xì)胞周期及凋亡的變化，初步明確OLFML2A基因?qū)Ω伟┘?xì)胞生物學(xué)行為的影響。方法：方法：1、構(gòu)建OLFML2A基因RNAi慢病毒；2、采用熒光顯微鏡觀察GFP綠色熒光來確定感染效率，通過RTqPCR及Westernbolt等分析感染慢病毒后OLF

2、ML2A基因表達(dá)的變化；3、對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的BEL7404細(xì)胞株分為兩組：慢病毒空載體組和慢病毒組，分別感染慢病毒空載體和慢病毒，Celigo法檢測(cè)肝癌BEL7404細(xì)胞的生長(zhǎng)速度；MTT法檢測(cè)細(xì)胞倍增速率；FACS法檢測(cè)細(xì)胞增殖周期和凋亡的變化。結(jié)果：結(jié)果：1、成功構(gòu)建OLFML2A基因的RNAi慢病毒。2、人肝癌BEL7404細(xì)胞株成功被OLFML2A基因RNAi慢病毒感染，顯微鏡下綠色熒光，其感染效率達(dá)80%；感染后OLFML2A基因

3、mRNA水平顯著下降（p=0.006，p0.05），蛋白水平OLFML2A基因的表達(dá)明顯減少（p0.01），其敲減效率為68.6%。3、BEL7404細(xì)胞感染慢病毒后：相比慢病毒空載體組，慢病毒組的BEL7404細(xì)胞生長(zhǎng)速率持續(xù)受到抑制(p=0.001p＜0.05）；于細(xì)胞感染后第5天，慢病毒組G1期的細(xì)胞減少(p＜0.05），處于S期的細(xì)胞數(shù)量無顯著變化，G2M期細(xì)胞顯著增多(p＜0.05）；細(xì)胞感染后第3天，慢病毒組發(fā)生凋亡的細(xì)胞數(shù)