siRNA干擾HBV陽性肝癌細(xì)胞BubR1對癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響.pdf

1、目的:
　　siRNA干擾HBV陽性肝癌細(xì)胞BubR1對癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響。
　　方法:
　　1、根據(jù)基因庫中BubR1序列,由Invitrogen公司設(shè)計并提供3對不同的干擾siRNA序列。
　　2、采用RT-PCR技術(shù)檢測五株肝癌細(xì)胞(HBV陰性及HBV陽性)中BubR1 mRNA表達量最高的細(xì)胞,并且作為后續(xù)試驗研究對象。
　　3、實驗分為五組,采用westrn blot技術(shù)檢測干預(yù)BubR1表達

2、后其蛋白在肝癌細(xì)胞中的表達。
　　4、采用MTT細(xì)胞增殖實驗、平板克隆法、細(xì)胞流式實驗檢測轉(zhuǎn)染3對siRNA序列沉默BubR1基因后對細(xì)胞增殖能力、克隆形成能力、細(xì)胞凋亡以及周期的影響。
　　結(jié)果:
　　1、RT-PCR技術(shù)檢測結(jié)果顯示:BubR1 mRNA在乙型肝病毒陰性性肝癌細(xì)胞系中低于乙型肝炎病毒陽性肝癌細(xì)胞系中的表達,并且在HepG2.2.15中表達量最高。
　　2、采用Western blot技術(shù)檢測B

3、ubR1蛋白在正常組、陰性組、干預(yù)組的表達量,其結(jié)果顯示:BubR1蛋白在正常組和陰性組表達明顯高于干擾組(C、D、E)(p<0.05),差異性具有統(tǒng)計學(xué)意義,且干擾組E表達量最低。
　　3、通過MTT及克隆平板實驗檢測干擾BubR1后細(xì)胞的生長情況、增殖及侵襲能力,實驗結(jié)果顯示,干擾BubR1表達后,干擾組相比正常組及陰性組生長增殖能力受到抑制,且干擾組E抑制最明顯(P<0.05),具有統(tǒng)計學(xué)意義。另外凋亡與周期實驗結(jié)果表明,干

4、擾組與對照組(正常組及陰性組)對比,凋亡率增加,且干擾組E凋亡率最明顯(P<0.05),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義;與正常組及陰性組相比,干擾組S、G2期細(xì)胞增加,且干擾組E增加更明顯p<0.05,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)論:
　　1、在體外干擾BubR1后其蛋白在HepG2.2.15細(xì)胞中表達量下調(diào)。
　　2、在體外干擾BubR1后,HepG2.2.15細(xì)胞株的生長、增殖以及周期受影響,具體表現(xiàn)為:MTT增殖能力減弱,凋