皮質(zhì)酮對不同TI表型肉雞胸肌蛋白質(zhì)和能量代謝以及對膽固醇代謝的影響研究.pdf

1、緊張性不動(dòng)（TI），是動(dòng)物面對外界強(qiáng)烈刺激時(shí)因恐懼而呈現(xiàn)出全身不動(dòng)的一種狀態(tài)，根據(jù)TI持續(xù)時(shí)間可以分為短TI(STI)和長TI(LTI)兩種反應(yīng)表型。下丘腦-垂體-腎上腺（HPA）軸控制著反應(yīng)激素的合成與釋放，對TI持續(xù)時(shí)間有顯著影響。在正常和應(yīng)激狀態(tài)下，不同TI表型肉雞的生長性能和福利狀況存在差異，STI表型肉雞要優(yōu)于LTI表型肉雞。以往的研究表明，長期低劑量皮質(zhì)酮（CORT）處理可抑制肉雞胸肌的生長發(fā)育。慢性皮質(zhì)酮處理主要通過增加機(jī)

2、體氧化應(yīng)激損傷，而TI影響肌肉生長可能與糖代謝水平不同有關(guān)。肌肉蛋白質(zhì)代謝水平是決定肌肉生長的重要環(huán)節(jié)，本實(shí)驗(yàn)在前期研究基礎(chǔ)上，從骨骼肌蛋白質(zhì)代謝和能量代謝角度，進(jìn)一步研究慢性應(yīng)激和TI影響骨骼肌生長的機(jī)制。此外，探索了慢性CORT應(yīng)激對肉雞膽固醇代謝的影響及機(jī)理，為研究肉雞福利和肌肉品質(zhì)提供參考資料。
　　1.慢性CORT處理對不同TI表型肉雞胸肌蛋白質(zhì)代謝的影響
　　根據(jù)TI的持續(xù)時(shí)間長短不同，將肉雞分成STI和LTI組

3、。從27日齡開始，在飲水中添加CORT(5 mg/L)并連續(xù)處理15d，以模擬慢性應(yīng)激時(shí)體內(nèi)的CORT水平，于42日齡時(shí)結(jié)束實(shí)驗(yàn)。前期研究資料表明，CORT和LTI表型顯著降低肉雞體重和胸肌/體重比。為了研究LTI型和慢性CORT處理抑制胸肌生長的機(jī)制，檢測了蛋白質(zhì)合成通路以及蛋白質(zhì)降解關(guān)鍵基因mRNA水平。結(jié)果顯示，TI和CORT對蛋白質(zhì)合成通路Akt/mTOR/p70s6k以及蛋白質(zhì)降解的關(guān)鍵基因Atrogin-1和MuRF1均沒有

4、顯著影響。但Western blot結(jié)果顯示，LTI肉雞胸肌中Akt(p=0.05)和p-Akt(p=0.06)比STI肉雞高;與對照組相比，慢性CORT處理組肉雞胸肌中總Akt(p=0.09)和p70s6k(p=0.08)蛋白有降低的趨勢。
　　提示LTI和CORT影響肉雞骨骼肌的生長可能不是主要通過依賴mTOR的信號通路，但對蛋白質(zhì)降解途徑的影響仍需進(jìn)一步研究。
　　2.慢性CORT處理對不同TI表型肉雞胸肌能量代謝的影

5、響
　　對于鳥類的胸肌，糖酵解途徑可以提供能量供肌肉收縮和生長發(fā)育。我們以往研究顯示LTI表型和皮質(zhì)酮處理導(dǎo)致肌肉糖酵解效率降低，從而抑制了肌肉的生長和發(fā)育。因此我們猜想LTI和CORT引起了肉雞骨骼肌能量儲(chǔ)存和代謝的改變。通過檢測胸肌和肝臟糖元含量，用高壓液相的方法檢測胸肌中ATP的含量以研究慢性CORT處理對不同TI表型肉雞肌肉能量儲(chǔ)存狀態(tài)的影響。結(jié)果顯示，STI肉雞胸肌ATP含量，能荷（EC）和肌糖元含量顯著高于LTI表型。

6、但是LTI肉雞胸肌的ADP含量(p=0.08)有高于STI表型肉雞的趨勢。慢性CORT處理顯著降低肝糖原的含量，但是顯著升高胸肌中的EC。Real-time PCR測定結(jié)果表明STI肉雞胸肌中PPARα(p=0.06)和AMPKα(p=0.09) mRNA的表達(dá)有高于LTI表型的趨勢。慢性CORT處理顯著降低了胸肌糖酵解基因α-enolase的表達(dá)。提示:LTI表型和慢性CORT處理對胸肌能量儲(chǔ)存產(chǎn)生顯著影響。
　　線粒體的氧化磷

7、酸化對能量穩(wěn)態(tài)至關(guān)重要。對線粒體能量代謝相關(guān)指標(biāo)進(jìn)行測定。結(jié)果顯示，STI表型肉雞胸肌的mtDNA拷貝數(shù)和細(xì)胞色素c氧化酶活力均高于LTI。用Real-time PCR方法檢測了mtDNA編碼的氧化磷酸化基因的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)COX1、COX2、NADH脫氫亞基1、3和6在STI表型肉雞的胸肌中表達(dá)高于LTI型。但線粒體調(diào)控區(qū)啟動(dòng)子的甲基化活性在TI和CORT組并沒有顯著改變。PGC-1α蛋白對線粒體的生物合成起主要調(diào)控作用，在STI表型肉雞

8、中表達(dá)高于LTI表型。但是，TI和CORT不影響位于線粒體內(nèi)膜參與質(zhì)子傳遞的avUCP蛋白表達(dá)。
　　以上結(jié)果提示STI肉雞胸肌的線粒體功能比LTI強(qiáng)。而慢性CORT處理不改變線粒體代謝，提示線粒體對低劑量外源性CORT處理敏感性較弱。
　　3.慢性CORT處理肉雞胸肌、肝臟膽固醇代謝的影響
　　哺乳動(dòng)物長期處于內(nèi)源性糖皮質(zhì)激素(GC)濃度過高的狀態(tài)容易引起代謝紊亂癥和脂質(zhì)代謝紊亂，表現(xiàn)為血液中甘油三酯的增加和總膽固醇

9、水平的升高。然而，慢性CORT處理對肉雞膽固醇代謝的影響尚未見報(bào)道。本研究發(fā)現(xiàn)，慢性CORT處理極顯著增加了胸肌、腿肌和肝臟中總膽固醇的水平，同時(shí)慢性CORT處理增加了胸肌、肝臟中總甘油三酯的含量。CORT處理顯著上調(diào)胸肌組織中HMGCR的mRNA表達(dá)，11β-HSD1轉(zhuǎn)錄水平表達(dá)有下調(diào)的趨勢，但是不影響GR，11β-HSD2，CYP7A1，CYP27A1，ApoB和LDLR轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá)。此外，慢性CORT處理對肝臟組織CYP7A1和

10、ABCA1在mRNA水平有下調(diào)的趨勢。Western blot結(jié)果顯示，與對照組相比，CORT處理顯著增加核蛋白GR、HMGCR和LDLR的蛋白含量，對肌細(xì)胞全蛋白GR、ApoA1、11β-HSD2有增加趨勢。此外，慢性CORT處理顯著增加肝臟組織GR、11β-HSD2、LDLR的蛋白水平，但是對HMGCR的蛋白含量有下調(diào)趨勢。
　　以上結(jié)果表明，慢性CORT處理引起肉雞胸肌組織膽固醇的沉積，其機(jī)制可能與肌細(xì)胞內(nèi)合成膽固醇增加和攝