IBVZZ-V35弱毒株增殖特性與免疫原性研究及安全性評(píng)價(jià).pdf

1、傳染性支氣管炎(IB)是一種急性、高度接觸性傳染病，被世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）列為B類(lèi)疫病。該病毒的血清型眾多，變異速度快，交叉保護(hù)性差甚沒(méi)有。IBVZZ2004是從發(fā)病肉鴨中分離到的一株以生長(zhǎng)和免疫抑制為主要癥狀的病毒，對(duì)雛雞和雛鴨均易感，與國(guó)內(nèi)的其他IBV毒株存明顯差異，尚無(wú)有效的疫苗毒進(jìn)行防控。本實(shí)驗(yàn)室通過(guò)雞胚低溫誘導(dǎo)傳代，獲得了一株弱毒株IBVZZ-V35。本試驗(yàn)對(duì)該弱毒株的增殖特性、免疫原性進(jìn)行了研究，并評(píng)價(jià)了其安全性。

2、r>　　在SPF雞胚中的増殖特性。通過(guò)TaqMan實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)IBVZZ-V35在SPF雞胚上的增殖情況，結(jié)果表明，接種后37.8℃培養(yǎng)，52h~64h病毒的增殖量較高，60h達(dá)到峰值，即3.664×106copies/μL，此后逐漸下降；其EID50為10-6.25/0.2mL，比IBVZZV6的EID50(10-4.88/mL)有所上升。
　　免疫原性研究。IBVZZ-V35最低抗體保護(hù)效價(jià)，用ELISA檢測(cè)二免疫雞只抗

3、體效價(jià)，按照雞只抗體效價(jià)1:32、1:64、1:128進(jìn)行分組，每組5只，用IBVZZV6進(jìn)行攻毒，觀察一周，結(jié)果抗體效價(jià)1:32、1:64的雞只表現(xiàn)出明顯臨床癥狀，抗體效價(jià)1:128的雞只均無(wú)發(fā)病現(xiàn)象，確定其最低抗體保護(hù)效價(jià)為1:128。IBVZZ-V35接種SPF雛雞，7天后IBVZZV6攻毒，雞群未見(jiàn)發(fā)病，剖檢無(wú)病變，陽(yáng)性對(duì)照組表現(xiàn)出明顯的發(fā)病癥狀，發(fā)病率為71.42％，病死率為37.5％，表明該弱毒株免疫后能抵抗強(qiáng)毒株的攻擊。I

4、BVZZ-V35接種10日齡SPF雛雞，2mL/只，共10只，每間隔2周進(jìn)行免疫，ELISA檢測(cè)，結(jié)果表明：雞只三免后5天抗體效價(jià)均值在1:570，此后逐漸上升，三免后20-50天抗體效價(jià)均值較高在1:1360~1:1920，維持較高水平30天，55-75天抗體效價(jià)逐步下降，到三免后80天抗體效價(jià)均值下降至1:250，抗體效價(jià)持續(xù)下降，三免后95天抗體效價(jià)均值下降到最低保護(hù)以下為1:90。兔免疫原性檢測(cè)：弗氏佐劑乳化濃縮的病毒，每間隔2

5、周進(jìn)行免疫，三免后7天采血，間接ELISA測(cè)兔血清抗體效價(jià)，檢測(cè)結(jié)果80％（4/5）在1:3200。交叉保護(hù)性試驗(yàn)：IBVZZ-V35弱毒株接種SPF雛雞，二免后7天，接種IBV D株、IBV G株、IBV BJ株進(jìn)行攻毒，觀察2周，雞只均未發(fā)病，剖檢無(wú)病變，RT-PCR檢測(cè)IBV M基呈陽(yáng)性，表明IBVZZ-V35能夠保護(hù)IBV D株、IBV G株、IBV BJ株的感染，具有良好的交叉保護(hù)性。
　　安全性試驗(yàn)。接種IBVZZ-V

6、35的SPF雞只與未接種的SPF雞進(jìn)行混養(yǎng)感染，一周后雞只均無(wú)發(fā)病癥狀，RT-PCR均可擴(kuò)增出M基因。IBVZZ-V35在SPF雛雞中連續(xù)傳至20代，每代雞只均無(wú)發(fā)病現(xiàn)象，RT-PCR均可擴(kuò)增出病毒的M基因，選擇5代、10代、15代、20代，繼續(xù)觀察至45日齡，亦無(wú)發(fā)病現(xiàn)象。S1基因進(jìn)行核酸序列和氨基酸序列分析均未變異。
　　結(jié)果表明，通過(guò)低溫誘導(dǎo)雞胚傳代獲得IBVZZ-V35弱毒株，在SPF雞胚上具有良好的增殖特性，對(duì)雞和家兔均