Fn在硅烷化無(wú)機(jī)材料表面固定及定量表征方法研究.pdf

1、將蛋白質(zhì)等生物大分子固定在無(wú)機(jī)生物材料表面，能夠在不影響這些材料優(yōu)良的本體性能的基礎(chǔ)上，大幅度提高其生物相容性。然而，目前還沒(méi)有專(zhuān)門(mén)的方法對(duì)固定于無(wú)機(jī)材料表面的蛋白質(zhì)進(jìn)行定量檢測(cè)。本文分別研究了纖連蛋白(Fn)分子在氧化鈦表面的固定、Fn分子與CD34抗體在純鈦表面的固定、牛血清白蛋白(BSA)、Fn和層黏連蛋白(Ln)分子在Ca-Na玻璃表面的固定以及Fn分子在石英玻璃表面的固定。并應(yīng)用水接觸角、傅立葉變換紅外光譜、X光電子能譜和原子

2、力顯微鏡等對(duì)這些蛋白分子的固定過(guò)程進(jìn)行了檢測(cè)和分析。使用MicroBCA蛋白定量方法，對(duì)這些蛋白的固定進(jìn)行了量化研究，并且分析了該蛋白定量方法在不同材料表面上的應(yīng)用，以期探索出一種能夠廣泛適用于材料表面固定化蛋白定量檢測(cè)的有效手段，以指導(dǎo)無(wú)機(jī)生物材料表面生物化修飾的研究。
　　 (1)通過(guò)磷酸化學(xué)吸附，氧化鈦薄膜表面獲得了大量羥基。在此基礎(chǔ)上，進(jìn)行鈦氧薄膜表面硅烷化以引入了氨基，最后，在EDC/NHS體系催化下，將Fn分子共價(jià)固

3、定于氧化鈦表面。傅立葉變換紅外光譜結(jié)果和水接觸角分析顯示蛋白分子固定成功。
　　 (2)氧化鈦薄膜導(dǎo)致MicroBCA蛋白定量檢測(cè)呈假陽(yáng)性。排除光催化導(dǎo)致氧化鈦產(chǎn)生自由基的干擾后，假陽(yáng)性數(shù)值僅降低15.3％。MicroBCA試劑假陽(yáng)性產(chǎn)生的機(jī)制有待進(jìn)一步探索。
　　 (3)在純鈦表面，以層層自組裝方法固定在外層的蛋白，能夠通過(guò)MicroBCA方法進(jìn)行定量檢測(cè)；但是僅在固定量較大情況下適用于以APTE偶聯(lián)方法獲得的固定化蛋

4、白分子定量。
　　 (4)在Ca-Na玻璃表面，通過(guò)APTE偶聯(lián)分別共價(jià)接枝BSA、Fn和Ln，其接枝面密度分別為0.22μgl/cm2，0.907μg/cm2和0.38μg/cm2。
　　 (5)在一定范圍內(nèi)，隨孵化液濃度增加，硅烷化表面固定的Fn量也增大。孵化液的濃度在25～75μg/mL之間變化時(shí)，這個(gè)效應(yīng)最為顯著。當(dāng)孵化液濃度高于75μg/mL時(shí)，硅烷化表面蛋白固定量接近3μg/cm2，且不再隨孵化液濃度增加而顯