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文檔簡介
1、將蛋白質(zhì)等生物大分子固定在無機(jī)生物材料表面,能夠在不影響這些材料優(yōu)良的本體性能的基礎(chǔ)上,大幅度提高其生物相容性。然而,目前還沒有專門的方法對固定于無機(jī)材料表面的蛋白質(zhì)進(jìn)行定量檢測。本文分別研究了纖連蛋白(Fn)分子在氧化鈦表面的固定、Fn分子與CD34抗體在純鈦表面的固定、牛血清白蛋白(BSA)、Fn和層黏連蛋白(Ln)分子在Ca-Na玻璃表面的固定以及Fn分子在石英玻璃表面的固定。并應(yīng)用水接觸角、傅立葉變換紅外光譜、X光電子能譜和原子
2、力顯微鏡等對這些蛋白分子的固定過程進(jìn)行了檢測和分析。使用MicroBCA蛋白定量方法,對這些蛋白的固定進(jìn)行了量化研究,并且分析了該蛋白定量方法在不同材料表面上的應(yīng)用,以期探索出一種能夠廣泛適用于材料表面固定化蛋白定量檢測的有效手段,以指導(dǎo)無機(jī)生物材料表面生物化修飾的研究。
(1)通過磷酸化學(xué)吸附,氧化鈦薄膜表面獲得了大量羥基。在此基礎(chǔ)上,進(jìn)行鈦氧薄膜表面硅烷化以引入了氨基,最后,在EDC/NHS體系催化下,將Fn分子共價(jià)固
3、定于氧化鈦表面。傅立葉變換紅外光譜結(jié)果和水接觸角分析顯示蛋白分子固定成功。
(2)氧化鈦薄膜導(dǎo)致MicroBCA蛋白定量檢測呈假陽性。排除光催化導(dǎo)致氧化鈦產(chǎn)生自由基的干擾后,假陽性數(shù)值僅降低15.3%。MicroBCA試劑假陽性產(chǎn)生的機(jī)制有待進(jìn)一步探索。
(3)在純鈦表面,以層層自組裝方法固定在外層的蛋白,能夠通過MicroBCA方法進(jìn)行定量檢測;但是僅在固定量較大情況下適用于以APTE偶聯(lián)方法獲得的固定化蛋
4、白分子定量。
(4)在Ca-Na玻璃表面,通過APTE偶聯(lián)分別共價(jià)接枝BSA、Fn和Ln,其接枝面密度分別為0.22μgl/cm2,0.907μg/cm2和0.38μg/cm2。
(5)在一定范圍內(nèi),隨孵化液濃度增加,硅烷化表面固定的Fn量也增大。孵化液的濃度在25~75μg/mL之間變化時(shí),這個(gè)效應(yīng)最為顯著。當(dāng)孵化液濃度高于75μg/mL時(shí),硅烷化表面蛋白固定量接近3μg/cm2,且不再隨孵化液濃度增加而顯
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