終止子元件在鏈霉菌中的定量表征.pdf

1、合成生物學(xué)作為本世紀(jì)新興的一門(mén)學(xué)科，已經(jīng)向人們展示了其在醫(yī)藥工業(yè)中發(fā)揮的巨大潛力。近年來(lái)由于抗生素的濫用使得病原菌的耐藥性一直居高不下，挖掘更多的新化合物成為解決這一困境最為直接的策略。自然界中大部分天然產(chǎn)物來(lái)自于放線(xiàn)菌，其中大部分來(lái)自鏈霉菌，因此利用合成生物學(xué)挖掘鏈霉菌中新的化合物成為近期研究的熱點(diǎn)。相應(yīng)的鏈霉菌中關(guān)于合成生物學(xué)元件的研究也有了突破進(jìn)展，本論文主要在鏈霉菌中終止子元件的篩選、定量表征及應(yīng)用幾個(gè)方面展開(kāi)研究:
　　

2、一、對(duì)鏈霉菌中的終止子元件的篩選和定量表征。以本實(shí)驗(yàn)室在鏈霉菌中啟動(dòng)子、RBS這些生物學(xué)元件量化的研究平臺(tái)為基礎(chǔ)，繼續(xù)對(duì)其終止子元件進(jìn)行探索。根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道選取委內(nèi)瑞拉鏈霉菌這一宿主，用含有xy1E基因和neo基因的雙報(bào)告系統(tǒng)篩選方法，從人工合成的22個(gè)終止子中篩選到12個(gè)在委內(nèi)瑞拉鏈霉菌中工作的終止子。然后對(duì)這些終止子的強(qiáng)度進(jìn)行定量表征，得到強(qiáng)度范圍在4.4～57.8倍范圍內(nèi)變化的終止子。與此同時(shí)還發(fā)現(xiàn)，不同的終止子對(duì)其上游基因的表達(dá)有

3、不同程度的影響。
　　二、在不同鏈霉菌中對(duì)終止子普適性進(jìn)行驗(yàn)證及將其應(yīng)用于阿維菌素的生物合成基因簇中。我們還將其在天藍(lán)色鏈霉菌中進(jìn)行了半定量測(cè)試，結(jié)果與委內(nèi)瑞拉中一致，證明篩選到的終止子在鏈霉菌中的普適性。與此同時(shí)還用阿維鏈霉菌中自身的番茄紅素基因進(jìn)行測(cè)試，發(fā)現(xiàn)終止子影響上游基因表達(dá)量的現(xiàn)象在不同基因間有一定的差異。最后，我們從定量表征的終止子中選取兩個(gè)強(qiáng)度比較好的termA47和term5，應(yīng)用于阿維鏈霉菌中以解決其體內(nèi)aveR