褪黑素對肝星狀細胞中TGF-β1-Smad信號通路的影響.pdf

1、背景：肝硬化是眾多慢性肝病的終末階段，臨床上除了肝移植仍無特別有效的治療藥物。肝纖維化為肝硬化必經(jīng)階段，研究發(fā)現(xiàn)肝纖維化是可以逆轉的，這為治療肝硬化帶來可能。肝纖維化過程有許多細胞及因子參與，導致細胞外基質大量堆積、肝小葉形成，最終導致肝硬化。肝星狀細胞（Hepatic stellate cells，HSCs）為肝臟間質細胞的一種，正常情況下參與肝臟多種功能。在急慢性肝損傷時，肝星狀細胞被活化為肌成纖維樣細胞，合成及分泌大量細胞外基質，

2、并抑制金屬蛋白酶活性使細胞外基質降解減少，最終導致細胞外基質的堆積。故抑制肝星狀細胞活化或促進其凋亡成為治療肝纖維化的靶點之一。轉化生長因子-β1（transforming growth factor-β1，TGF-β1）為刺激肝星狀細胞活化的主要細胞因子之一，相關實驗顯示阻斷 TGF-β1/Smad信號通路可改善肝纖維化。褪黑素（melatonin，MEL）主要是由下丘腦分泌的活性物質，參與機體生物節(jié)律的調節(jié)，與睡眠和衰老相關。實驗研

3、究顯示褪黑素可改善肝纖維化，其作用可能與抗炎及抗氧化、調控凋亡信號、抑制肝星狀細胞等機制相關，但具體機制仍待進一步研究。本實驗組前期實驗結果顯示褪黑素可緩解四氯化碳誘導的大鼠肝纖維化，其機制可能與其抗氧化及阻斷TGF-β1/Smad信號通路相關。關于褪黑素直接干預肝星狀細胞、抑制其活化的機制與TGF-β1/Smad信號通路的關系，國內外文獻報道較少。本研究通過體外實驗進一步探討褪黑素對肝纖維化保護作用與 TGF-β1/Smad信號通路的

4、關系。
　　方法：肝星狀細胞被分為5組，分別為：對照組、模型組和3組不同劑量褪黑素實驗組，培養(yǎng)24 h貼壁后換用無血清培養(yǎng)基，除對照組外均加入TGF-β1，同時在實驗組加入不同濃度的褪黑素（1nmol/L，1μmol/L，0.1mmol/L），藥物孵育48h后，通過 MTT實驗檢測褪黑素對肝星細胞增殖的影響，通過細胞免疫組化法及western blot法檢測褪黑素對肝星狀細胞中α-SMA及 TGF-β1/Smad信號通路中Smad

5、蛋白表達的影響。
　　結果：與對照組相比，TGF-β1可明顯刺激肝星狀細胞的增殖及α-SMA的表達（p<0.05）。與模型組相比，褪黑素可明顯抑制肝星狀細胞的增殖，且具有統(tǒng)計學意義（p<0.05）；細胞免疫組化的結果顯示α-SMA及Smad2/3主要表達在細胞質中，p-Smad2/3主要表達在細胞核中。與模型組相比，褪黑素可抑制α-SMA、Smad2/3和p-Smad2/3的表達（p<0.05）；western blot法檢測Sm