褪黑素對(duì)肝星狀細(xì)胞中TGF-β1-Smad信號(hào)通路的影響.pdf

1、背景：肝硬化是眾多慢性肝病的終末階段，臨床上除了肝移植仍無(wú)特別有效的治療藥物。肝纖維化為肝硬化必經(jīng)階段，研究發(fā)現(xiàn)肝纖維化是可以逆轉(zhuǎn)的，這為治療肝硬化帶來(lái)可能。肝纖維化過(guò)程有許多細(xì)胞及因子參與，導(dǎo)致細(xì)胞外基質(zhì)大量堆積、肝小葉形成，最終導(dǎo)致肝硬化。肝星狀細(xì)胞（Hepatic stellate cells，HSCs）為肝臟間質(zhì)細(xì)胞的一種，正常情況下參與肝臟多種功能。在急慢性肝損傷時(shí)，肝星狀細(xì)胞被活化為肌成纖維樣細(xì)胞，合成及分泌大量細(xì)胞外基質(zhì)，

2、并抑制金屬蛋白酶活性使細(xì)胞外基質(zhì)降解減少，最終導(dǎo)致細(xì)胞外基質(zhì)的堆積。故抑制肝星狀細(xì)胞活化或促進(jìn)其凋亡成為治療肝纖維化的靶點(diǎn)之一。轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1（transforming growth factor-β1，TGF-β1）為刺激肝星狀細(xì)胞活化的主要細(xì)胞因子之一，相關(guān)實(shí)驗(yàn)顯示阻斷 TGF-β1/Smad信號(hào)通路可改善肝纖維化。褪黑素（melatonin，MEL）主要是由下丘腦分泌的活性物質(zhì)，參與機(jī)體生物節(jié)律的調(diào)節(jié)，與睡眠和衰老相關(guān)。實(shí)驗(yàn)研

3、究顯示褪黑素可改善肝纖維化，其作用可能與抗炎及抗氧化、調(diào)控凋亡信號(hào)、抑制肝星狀細(xì)胞等機(jī)制相關(guān)，但具體機(jī)制仍待進(jìn)一步研究。本實(shí)驗(yàn)組前期實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示褪黑素可緩解四氯化碳誘導(dǎo)的大鼠肝纖維化，其機(jī)制可能與其抗氧化及阻斷TGF-β1/Smad信號(hào)通路相關(guān)。關(guān)于褪黑素直接干預(yù)肝星狀細(xì)胞、抑制其活化的機(jī)制與TGF-β1/Smad信號(hào)通路的關(guān)系，國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)報(bào)道較少。本研究通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步探討褪黑素對(duì)肝纖維化保護(hù)作用與 TGF-β1/Smad信號(hào)通路的

4、關(guān)系。
　　方法：肝星狀細(xì)胞被分為5組，分別為：對(duì)照組、模型組和3組不同劑量褪黑素實(shí)驗(yàn)組，培養(yǎng)24 h貼壁后換用無(wú)血清培養(yǎng)基，除對(duì)照組外均加入TGF-β1，同時(shí)在實(shí)驗(yàn)組加入不同濃度的褪黑素（1nmol/L，1μmol/L，0.1mmol/L），藥物孵育48h后，通過(guò) MTT實(shí)驗(yàn)檢測(cè)褪黑素對(duì)肝星細(xì)胞增殖的影響，通過(guò)細(xì)胞免疫組化法及western blot法檢測(cè)褪黑素對(duì)肝星狀細(xì)胞中α-SMA及 TGF-β1/Smad信號(hào)通路中Smad

5、蛋白表達(dá)的影響。
　　結(jié)果：與對(duì)照組相比，TGF-β1可明顯刺激肝星狀細(xì)胞的增殖及α-SMA的表達(dá)（p<0.05）。與模型組相比，褪黑素可明顯抑制肝星狀細(xì)胞的增殖，且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）；細(xì)胞免疫組化的結(jié)果顯示α-SMA及Smad2/3主要表達(dá)在細(xì)胞質(zhì)中，p-Smad2/3主要表達(dá)在細(xì)胞核中。與模型組相比，褪黑素可抑制α-SMA、Smad2/3和p-Smad2/3的表達(dá)（p<0.05）；western blot法檢測(cè)Sm