鈉氫離子交換抑制劑（HOE642）在熱缺血死亡大鼠尸體心臟移植中的研究.pdf

1、目的：本課題在建立熱缺血死亡大鼠頸部異位心臟移植模型的基礎上，通過對熱缺血死亡后不同時段的大鼠心臟添加HOE642(濃度為20μmol/L)灌注，然后對移植術后供體進行如下檢測：心肌細胞超微結構檢查，心肌ATP、SOD、MDA的變化，RT-PCR法檢測Bcl-2、Bax基因的表達，免疫組化檢測Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白的表達，以觀察HOE642對熱缺血死亡大鼠尸體心臟心肌的保護作用并探討可能機制。 方法：實驗分為

2、二大部分。第一部分為大鼠頸部異位熱缺血死亡心臟移植模型的建立：采用頸部Cuff法進行大鼠頸部異位心臟移植，共進行25對大鼠的實驗；第二部分為鈉氫離子交換抑制劑(HOE642)對熱缺血死亡大鼠尸體心臟移植的影響：取清潔級SD(Sprague-Dawley)雄性大鼠，共112只，隨機分成7組：每組8只，具體如下：C、正常心臟對照組；S10、心臟停搏后10分鐘取心移植組；SH10、心臟停搏后10分鐘取心并用HOE642灌注移植組；S30、心臟

3、停搏后30分鐘取心移植組；SH30、心臟停搏后30分鐘取心并用HOE642灌注移植組；S45、心臟停搏后45分鐘取心移植組；SH45、心臟停搏后45分鐘取心并用HOE642灌注移植組。對實驗組大鼠均采用熱缺血死亡處理，取得供體后分別于S10、S30、S45組用STH-1液灌注30分鐘，SH10、SH30、SH45組用STH-1液+HOE642(濃度為20μmol/L)灌注30分鐘，再用頸部Cuff法進行異位心臟移植。S10、SH10、S

4、30、SH30于移植后48小時取供心標本，S45、SH45組于移植術后去供心標本。然后對標本進行如下檢測：透射電鏡觀察心肌組織超微結構、高效液相色譜法測定心肌細胞的ATP、RT-PCR檢測心肌細胞Bcl-2、Bax基因的表達，TUNEL法檢測心肌細胞凋亡情況并用免疫組織化學技術檢測Bcl-2、Bax、Caspase-3基因蛋白水平的表達情況。 所有數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差(x±s)表示，用SPSS13.0統(tǒng)計軟件自動分析，比較兩組之間

5、的差異采用student t檢驗，多組間的差異比較采用方差分析；統(tǒng)計結果處理：以P<0.05表示差異有統(tǒng)計意義(差異顯著)，P<0.01表示差異有高度統(tǒng)計意義(差異極顯著)，而P>0.05表示差異無統(tǒng)計意義(差異無意義)。 結果： 1、失血休克死亡瀕死時間觀察：大鼠腹主動脈橫斷放血后9～11(10.11±0.59)min，心電波消失，認為死亡。所有手術均由2人配合完成，移植手術總時間為45～75(54±3)min；其中供

6、心準備時間4～8(6±2)min，供心移植時間3～10(4±5)min，受體準備時間12～25(17±7)min。 2、實驗S10、SH10、S30、SH30組頸部心臟移植術后受體均順利存活48小時；實驗S45、SH45組頸部心臟移植術后，移植心無法復跳； 3、電鏡檢查顯示：實驗S10組的肌纖維間膠原纖維增生，線粒體水腫；肌纖維的肌絲結構模糊，實驗SH10組的線粒體大多正常，部分線粒體輕度水腫；肌纖維走向規(guī)則，少部分肌纖

7、維結構模糊，肌漿網(wǎng)擴張，病變較S10組輕。實驗S30組的肌間質炎性細胞浸潤；核固縮，核周水腫，肌膜下線粒體空泡化；肌絲結構模糊，線粒體排列紊亂；肌漿網(wǎng)擴張明顯，肌間質水腫，肌纖維結構模糊；相比下實驗SH30組肌細胞水腫程度較輕，膠原部分增生，線粒體水腫或空泡化程度也較輕，核固縮，核周水腫。 4、S10組的ATP含量比SH10組低，差異顯著；S30組的ATP含量比SH30組低，差異顯著；S45組與SH45組的ATP含量無明顯差異；

8、 5、本實驗中S10、SH10、S30、SH30、S45、SH45組的SOD含量均比C組低，而MDA含量均比C組高；其中S10組的SOD含量比SH10組低，而MDA含量則高，差異顯著；S30組與SH30組的結果比較也是如此，差異極顯著； 6、TUNEL法檢測心肌凋亡細胞隨著熱缺血時間的增加而明顯增多；采用RT-PCR檢測Bcl-2基因的電泳圖也顯示實驗C組的表達最強，ROD值最大，同時Bax基因的電泳圖也顯示實驗C組的表

9、達最弱，ROD值最??；另外通過免疫組織化學方法檢測到實驗組與正常組--實驗C組比較，Caspase-3蛋白表達增加，Bcl-2蛋白表達水平下調(diào)，Bax蛋白表達增加，并且與熱缺血時間長短呈正相關； 7、TUNEL法檢測S10組與SH10組心肌TUNEL陽性細胞數(shù)前者較多，且差異有顯著意義；S30組與Sn30組心肌TUNEL陽性細胞數(shù)前者較多，且差異有顯著意義；采用RT-PCR檢測Bcl-2基因的ROD值，S10組小于SH10組，S

10、30組也大于SH30組；而Bax基因的ROD值正好相反，差異均具有統(tǒng)計學意義； 8、通過免疫組織化學方法檢測Bcl-2蛋白表達水平S10組小于SH10組，S30組也小于SH30組；而Bax、Caspase-3蛋白表達水平正好相反，差異均具有統(tǒng)計學意義。S45和SH45組間結果均無統(tǒng)計學差異。 結論： 1、大鼠頸部異位心臟移植模型是一種簡便易行，穩(wěn)定可靠的動物模型，有是進行缺血/再灌注損傷、移植免疫耐受、心肌保護等

11、多方面基礎研究的理想動物模型。 2、HOE642能促進熱缺血死亡后(30分鐘內(nèi))大鼠心臟能量物質ATP合成增加，改善心臟的能量代謝。 3、HOE642能促進熱缺血死亡后(30分鐘內(nèi))大鼠心臟的SOD的含量，提高清除氧自由基的能力，同時能減少MDA的生成以減輕脂質過氧化損傷。 4、HOE642能抑制熱缺血死亡后(30分鐘內(nèi))大鼠心臟心肌細胞凋亡的發(fā)生。 5、對熱缺血死亡后45分鐘的大鼠心臟應用HOE642的