梨品種SSR特征指紋數(shù)據(jù)表構(gòu)建與應(yīng)用.pdf

1、梨是薔薇科(Rosaceae)，梨亞科(Romoideae)，梨屬（Pyrus）多年生落葉喬木。我國(guó)是梨的主要起源中心，種質(zhì)資源非常豐富。傳統(tǒng)的鑒定方法對(duì)品種進(jìn)行鑒別已不能滿足需求，利用分子標(biāo)記技術(shù)從DNA水平對(duì)品種進(jìn)行鑒別更為便捷、可靠。SSR標(biāo)記呈共顯性遺傳、多態(tài)性高、重復(fù)性好。篩選帶型清晰、多態(tài)性高、重復(fù)性好的SSR核心引物，建立一套簡(jiǎn)便、快速、可靠的梨品種鑒定技術(shù)體系應(yīng)用于梨品種鑒定，也有利于進(jìn)行品種權(quán)利保護(hù)，維護(hù)育種者和生產(chǎn)者

2、的利益，保障果樹(shù)產(chǎn)業(yè)健康發(fā)展。
　　本試驗(yàn)利用來(lái)源于不同梨系統(tǒng)、遺傳背景差異較大的12份梨種質(zhì)資源對(duì)已報(bào)道的800對(duì)梨和蘋(píng)果的SSR引物及本課題組根據(jù)梨基因組數(shù)據(jù)開(kāi)發(fā)的534對(duì)SSR引物進(jìn)行篩選，并利用篩選到的核心引物對(duì)125份主要的梨種質(zhì)資源進(jìn)行遺傳多樣性分析和聚類(lèi)分析，驗(yàn)證結(jié)果。本研究的主要內(nèi)容和結(jié)果如下:
　　1.梨SSR-PCR反應(yīng)體系的優(yōu)化結(jié)果:20μL PCR反應(yīng)體系中各成分濃度10×PCR Buffer（Mg2

3、+）保持1倍濃度、dNTPs0.2 mmol/L，引物0.5μmol/L，模板DNA2.5ng/μL、Taq酶0.025U/uL。
　　2.篩選到25對(duì)清晰、穩(wěn)定、多態(tài)性高的引物，并在48份梨種質(zhì)資源中進(jìn)行驗(yàn)證，共檢測(cè)到387個(gè)等位基因，平均每個(gè)位點(diǎn)等位基因數(shù)15.48個(gè);多態(tài)性信息含量變幅為0.70～0.92，平均值0.85。聚類(lèi)分析結(jié)果與種質(zhì)親緣關(guān)系吻合，表明這25對(duì)SSR引物可以作為梨品種鑒定的核心引物。
　　3.構(gòu)建

4、了124個(gè)梨栽培品種SSR特征指紋圖譜與分子身份證:25對(duì)SSR核心引物可以區(qū)分124個(gè)梨品種中除4組共9個(gè)品種以外的115個(gè)梨品種，共擴(kuò)增出了21個(gè)～69個(gè)基因型，按25個(gè)引物擴(kuò)增的基因型數(shù)目從多到少對(duì)SSR位點(diǎn)進(jìn)行排序，并利用Excel對(duì)供試品種進(jìn)行排序區(qū)分和數(shù)據(jù)背景顏色標(biāo)示，生成124份品種的SSR特征指紋數(shù)據(jù)表。對(duì)124個(gè)品種SSR特征指紋數(shù)據(jù)表前10個(gè)SSR位點(diǎn)的基因型從00向99賦值編號(hào)，并依據(jù)各SSR位點(diǎn)在表中的順序?qū)⒕幪?hào)

5、串聯(lián)生成各品種的分子身份證號(hào)碼。
　　4.對(duì)125份梨種質(zhì)資源進(jìn)行了遺傳多樣性分析:25對(duì)SSR引物在125份梨種質(zhì)材料中共檢測(cè)到453個(gè)等位基因，平均每個(gè)位點(diǎn)擴(kuò)增到18.12個(gè)等位基因。供試SSR引物檢測(cè)到基因型數(shù)目從21個(gè)～72個(gè)不等，平均每個(gè)SSR引物檢測(cè)到46.52個(gè)基因型。引物多態(tài)信息含量PIC值最小0.71，最大0.92，平均為0.85。聚類(lèi)分析結(jié)果表明，125份梨品種資源總體上被分為東方梨和西洋梨2個(gè)類(lèi)群。東方梨中白