山西梨屬主要栽培品種EST-SSR指紋圖譜的構(gòu)建.pdf

1、我國(guó)的梨屬(PyrusL.)植物種質(zhì)資源相當(dāng)豐富，山西作為梨的主要產(chǎn)區(qū)之一也有很多品種。但由于梨屬植物缺乏栽培種的野生種群、梨品種之間的形態(tài)差異較小等原因，形成了很多有爭(zhēng)議品種，導(dǎo)致現(xiàn)有梨的新品種得不到有效的保護(hù)，因而對(duì)梨品種進(jìn)行快速準(zhǔn)確的鑒定，對(duì)促進(jìn)我國(guó)梨種質(zhì)資源的利用和品種鑒定具有重要的意義。（EST-SSR標(biāo)記充分利用現(xiàn)有的信息數(shù)據(jù)，避免構(gòu)建文庫(kù)及測(cè)序而獲得標(biāo)記的繁瑣步驟，開(kāi)發(fā)的標(biāo)記揭示的多態(tài)性較高，提供的信息量豐富。該標(biāo)記已廣泛

2、用于物種分類、物種鑒定以及遺傳多樣性分析等研究中。）本研究選用24個(gè)山西梨栽培品種為研究材料，采用EST-SSR分子標(biāo)記的方法分析梨品種間的遺傳多樣性，并構(gòu)建其特有的指紋圖譜。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:
　　 1.采用正交設(shè)計(jì)篩選、優(yōu)化及驗(yàn)證梨屬植物EST-SSR標(biāo)記中PCR反應(yīng)體系及程序。為確定PCR反應(yīng)的最佳體系，利用正交設(shè)計(jì)的實(shí)驗(yàn)方法，對(duì)梨屬植物的PCR反應(yīng)體系進(jìn)行優(yōu)化。最終確立梨SSR-PCR最佳的反應(yīng)體系（10μL）為:1.0μL

3、10×PCRBuffer、TaqDNA聚合酶1.4U、Mg2+2.0mmol/L、DNA模板50ng、dNTPs0.1mmol/L、引物0.5μmol/L。此體系在后續(xù)實(shí)驗(yàn)中得到驗(yàn)證。
　　 2.開(kāi)發(fā)梨屬植物EST-SSR標(biāo)記引物，并進(jìn)行篩選驗(yàn)證。利用已公布的1752條梨屬植物EST序列，選取78對(duì)梨屬植物的EST-SSR引物。采用這78對(duì)引物對(duì)24個(gè)梨品種進(jìn)行擴(kuò)增，共擴(kuò)增出558個(gè)等位位點(diǎn)，其中有30對(duì)引物能擴(kuò)增出336條大小

4、在預(yù)期片段范圍內(nèi)，清晰的多態(tài)性條帶，多態(tài)位點(diǎn)百分率達(dá)60.2％。PIC值變化范圍在0.56-0.91，平均為0.75。其中，引物BRC0003、BRC0004、BRC00010和BRC00044這4對(duì)引物可以完全區(qū)分24個(gè)梨屬品種。
　　 3.采用EST-SSR標(biāo)記分析梨屬植物的遺傳多樣性。聚類分析把24個(gè)梨品種分為5個(gè)類群。沙01和其余品種親緣關(guān)系最遠(yuǎn)，中梨三號(hào)和蘋(píng)果梨、碩豐梨為一個(gè)類群;阿巴特、紅茄梨、早熟阿巴特、巴梨為一個(gè)

5、類群，都屬于西洋梨種;其余15個(gè)品種聚為一類。結(jié)果顯示中梨三號(hào)和中華玉梨并不是同一品種，而玉露香梨和庫(kù)爾勒香梨親緣關(guān)系較近。
　　 4.采用EST-SSR標(biāo)記構(gòu)建出24個(gè)山西梨品種特有的指紋圖譜，能夠?qū)鎸僦参镞M(jìn)行鑒定，為建立梨樹(shù)植物指紋鑒定數(shù)據(jù)庫(kù)積累科學(xué)依據(jù);利用引物BRC0003、BRC00010和BRC00044構(gòu)建了24個(gè)梨屬植物材料的指紋圖譜。為了直觀方便對(duì)每一個(gè)梨屬植物品種的鑒定，還利用10對(duì)核心引物構(gòu)建了每一個(gè)品種