玉米品種DNA指紋數(shù)據(jù)庫(kù)構(gòu)建關(guān)鍵技術(shù)研究.pdf

1、玉米品種DNA指紋數(shù)據(jù)庫(kù)的構(gòu)建在玉米品種純度及真實(shí)性鑒定、品種權(quán)登記保護(hù)、區(qū)試及審定品種質(zhì)量監(jiān)控等方面具有重要應(yīng)用價(jià)值，對(duì)厘清我國(guó)玉米種質(zhì)的血緣關(guān)系、雜種優(yōu)勢(shì)群劃分、種質(zhì)創(chuàng)新及新品種選育具有重要指導(dǎo)意義。本論文研究目的是以SSR標(biāo)記為技術(shù)手段，通過對(duì)DNA快速提取方法、DNA分子檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)體系、核心引物組合、多重PCR、玉米品種DNA指紋數(shù)據(jù)庫(kù)管理系統(tǒng)、建庫(kù)標(biāo)準(zhǔn)化規(guī)范等構(gòu)建玉米DNA指紋庫(kù)關(guān)鍵技術(shù)環(huán)節(jié)進(jìn)行全面系統(tǒng)的研究，最終建立起玉米

2、標(biāo)準(zhǔn)DNA指紋數(shù)據(jù)庫(kù)構(gòu)建的技術(shù)平臺(tái)，在此基礎(chǔ)上，建立國(guó)內(nèi)主要玉米新品種的標(biāo)準(zhǔn)DNA指紋庫(kù)，并探索SSR技術(shù)在玉米品種鑒定中應(yīng)用的可能途徑。 本論文形成如下研究結(jié)果： (1) 從DNA提取、PCR擴(kuò)增、電泳檢測(cè)等環(huán)節(jié)對(duì)SSR技術(shù)進(jìn)行了全面優(yōu)化，最終建立一套快速準(zhǔn)確、經(jīng)濟(jì)簡(jiǎn)便、穩(wěn)定可靠的基于SSR分子標(biāo)記的玉米DNA指紋檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)體系。以此為基礎(chǔ)，制定了農(nóng)業(yè)部行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)《玉米品種鑒定DNA指紋方法》和《玉米品種一致性及真實(shí)性

3、DNA指紋檢測(cè)技術(shù)》。 (2) 對(duì)特征譜帶法、引物組合法和核心引物組合法等三種DNA指紋分析方法進(jìn)行比較，確立以核心引物組合法作為玉米標(biāo)準(zhǔn)DNA指紋庫(kù)建庫(kù)指導(dǎo)原則。 (3) 從玉米數(shù)據(jù)庫(kù)公布的1900多對(duì)SSR引物中篩選出一套在玉米染色體上均勻分布的多態(tài)性高、帶型分布合理的建庫(kù)用的核心引物，并利用引物設(shè)計(jì)軟件對(duì)入選引物位點(diǎn)重新設(shè)計(jì)出適于相同擴(kuò)增條件的新引物，最終建立起基于多重PCR和五色熒光技術(shù)的高通量的DNA指紋檢測(cè)平

4、臺(tái)。以此為主要內(nèi)容，申報(bào)專利《玉米真實(shí)性檢測(cè)試劑盒及其檢測(cè)方法》。 (4) 開發(fā)了一套功能強(qiáng)大、界面友好的玉米品種DNA指紋數(shù)據(jù)庫(kù)管理系統(tǒng)，該系統(tǒng)的品種查詢、品種比較、親子查詢、親子鑒定等功能已完成測(cè)試。 (5) 制定了一套統(tǒng)一的建庫(kù)標(biāo)準(zhǔn)化規(guī)范和要求，為不同實(shí)驗(yàn)室合作和數(shù)據(jù)整合提供基礎(chǔ)。 (6) 搜集整理國(guó)內(nèi)主要玉米雜交種及自交系1360份，并初步建立了玉米品種標(biāo)準(zhǔn)DNA指紋數(shù)據(jù)庫(kù)。 (7) 探索研究了S