基于NF-κB調(diào)控趨化因子研究復(fù)方茵陳脂肝顆粒治療非酒精性脂肪肝病的作用機制.pdf

1、目的:研究復(fù)方茵陳脂肝顆粒(ACF)對非酒精性脂肪肝大鼠及模型細胞NF-κ B及其調(diào)控的炎癥趨化因子表達的影響，探討ACF治療非酒精性脂肪肝病(NAFLD)的分子機制，為其在臨床應(yīng)用奠定理論基礎(chǔ)。
　　方法:
　　體內(nèi)實驗:選擇SPF級SD雄性大鼠72只，隨機分成正常對照組16只、模型組56只，模型組給予高脂飼料喂養(yǎng)6周后，分別從對照組和模型組隨機選取6只，取肝臟做病理切片，確認造模成功后將模型組大鼠隨機分為5組，即模型組、

2、陽性對照非諾貝特組、ACF低劑量組、ACF中劑量組、ACF高劑量組，每組10只，繼續(xù)予以高脂飼料喂養(yǎng)。對照組、模型組分別給予等量生理鹽水灌胃，非諾貝特按0.24g/kg.d1灌胃給藥，ACF低、巾、高劑量組分別按0.462g/kg·d10.924g/kg·d1及1.848g/kg·d1灌胃給藥。持續(xù)4周后取材，測量各組大鼠肝重及腎周和附睪脂肪的重量;分離血清，檢測ALT、AST、TG、TC、HDL-C、LDL-C的水平;HE染色觀察肝組

3、織病理學改變，油紅0染色觀察肝細胞內(nèi)脂質(zhì)沉積狀況;Real time-PCR和IHC分別檢測大鼠肝組織巾NF-κB、CCL2、CCL3、CCL4、CXCL10、TNF-α、IL-6 mRNA和蛋白表達。
　　體外實驗:采用油酸/棕櫚酸(OA/PA)共同刺激人肝癌細胞株HepG2，制備NAFLD體外細胞模型并用不同濃度ACF進行干預(yù)。油紅0染色觀察細胞胞漿內(nèi)脂質(zhì)沉積情況;細胞免疫熒光檢測NF-κB蛋白的表達，ELISA檢測細胞上清液

4、巾分泌的炎癥趨化因子CCL2、CCL3、CCL4、CXCL10、TNF-α、IL-6的表達。
　　結(jié)果:
　　體內(nèi)實驗:
　　(1)與正常組相比，模型組大鼠內(nèi)臟型肥胖，具有統(tǒng)計學差異（P＜0.05)，病理切片出現(xiàn)彌漫性肝細胞脂肪變性，主要為大泡性脂肪變性，并可見大量炎性細胞浸潤，油紅0染色可見肝細胞內(nèi)有大量脂質(zhì)沉積，血清ALT、AST、TG、TC、LDL-C的含量顯著增加，HDL-C含量明顯下降（P＜0.05），NF-

5、κ B和CCL2、CCL3、CCL4、CXCL10、TNF-α、IL-6 mRNA及蛋白的表達顯著升高（P＜0.05）;
　　(2)與模型組比較，非諾貝特組和ACF各劑量組的脂肪性炎性及脂質(zhì)沉積有明顯減輕和好轉(zhuǎn)，血清ALT、AST、TG、TC、LDL-C的含量明顯降低，HDL-C含量明顯上調(diào)（P＜0.05），大鼠肝組織NF-κB和CCL2、CCL3、CCL4、CXCL10、TNF-α、IL-6 mRNA及蛋白的表達顯著降低（P＜0

6、.05）。此外，ACF還能減輕大鼠內(nèi)臟型肥胖（P＜0.05）。
　　體外實驗:
　　(1)與對照組相比，模型組HepG2細胞經(jīng)油紅0染色后，胞漿內(nèi)有大量桔紅色或紅色的顆粒狀脂滴堆積，經(jīng)過不同濃度ACF干預(yù)24小時后，胞漿內(nèi)紅色顆粒狀脂滴有不同程度減少;
　　(2)免疫熒光結(jié)果顯示模型組中NF-κ B的熒光強度較對照組明顯增加，ACF干預(yù)后NF-κ B的熒光強度減弱;
　　(3) ELISA結(jié)果顯示細胞上清中CC1

7、2、CXCL10、TNF-α、IL-6的含量顯著升高，與對照組相比具有統(tǒng)計學差異（P＜0.05);ACF干預(yù)后24h后上清中CC12、CXCL10、TNF-α、IL-6的含量降低明顯，與模型組相比較均有顯著差異性（P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　(1)復(fù)方茵陳脂肝顆粒具有肝臟保護作用，能明顯改善NAFLD模型大鼠的肝臟脂肪變性、調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝和抑制體外模型細胞脂滴聚集。
　　(2)在NAFLD動物和細胞模型巾，復(fù)方茵陳